引用本文： 秦朗, 李小红, 罗珊, 汪燕, 李尚为, 杨业洲. 多囊卵巢综合征慢性炎性相关因子及趋化因子生长调节致癌基因-α表达的研究. 华西医学, 2015, 30(5): 890-894. doi: 10.7507/1002-0179.20150255 复制
多囊卵巢综合征（PCOS）是生育年龄妇女常见的内分泌紊乱性疾病。PCOS有复杂的内分泌异常及临床表现：高雄激素血症、胰岛素抵抗及高胰岛素血症、促性腺激素水平异常、月经紊乱、无排卵、多毛、肥胖、不孕合并双侧卵巢增大呈多囊改变[1]。但是PCOS的发病机制到目前为止尚未十分明了，一般认为高雄激素血症、胰岛素抵抗及高胰岛素血症可能是PCOS的发病机制[2]。自Kelly等[3]首次报道PCOS 患者可能存在慢性炎症以来，目前认为慢性炎症可能介导胰岛素抵抗参与PCOS的发生发展。这种慢性炎症不同于细菌、病毒等引起的急性炎症，是一种低度慢性亚临床炎症[4]。生长调节致癌基因（GRO）-α是属于ELR-CXC族的趋化因子，GRO-α参与多种炎性疾病的发生、发展和免疫反应[5]。有研究认为肿瘤坏死因子-α（TNF）-α表达过多，与GRO-α的表达上调有关[6]。本研究通过对PCOS颗粒细胞、卵泡液和血清炎性因子TNF-α、白细胞介素（IL）-6、IL-8和趋化因子GRO-α的表达以及与体质量指数（BMI）关系的探索，探讨慢性炎症在PCOS 发病过程中的可能作用机制。现报告如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
PCOS组：选择2014年1月－8月在四川大学华西第二医院生殖中心行体外受精（IVF）-胚胎移植（ET）的PCOS患者40例，年龄25～35岁，平均（28.1±4.3）岁。PCOS的诊断以2003年10月美国生殖医学学会于荷兰鹿特丹会议上修订的PCOS诊断标准[7]为依据：排卵减少或无排卵；临床或生物化学高雄激素表现；阴道超声每侧卵巢内直径2～9 mm 的卵泡≥12个或卵巢体积10 cm以上；具有以上3项中2项或以上，并排除了先天性肾上腺皮质增生、雄激素分泌肿瘤及库欣病等疾病。
对照组：选择2014年1月－8月在四川大学华西第二医院生殖中心行IVF-ET的不孕患者40例，年龄23～35岁，平均（27.8±4.5）岁，有原发或继发不孕2年以上，月经周期正常，内分泌测定正常；B型超声监测未提示卵巢多囊、子宫肌瘤及子宫内膜异位症等异常声像改变；不孕原因由男性因素或输卵管因素构成。
PCOS组和对照组均已签署知情同意书。因GRO-α在鼻息肉中有显著表达，因此GRO-α阳性标准对照标准选自鼻息肉患者[8-9]。
1.2 超促排卵治疗
PCOS组和对照组均采用IVF长方案，在上一个黄体中期用短效促性腺激素释放激素激动剂（GnRH-a），月经周期第3天用促性腺激素，月经周期第8天开始阴道B型超声检测卵泡的数目、卵泡的直径及子宫内膜的发育情况，当1个卵泡直径≥18 mm，2个或2个以上的卵泡直径≥16 mm时，注射人绒毛膜促性腺激素（hCG）10 000 U后34～36 h取卵。
1.3 标本采集和检测
1.3.1 颗粒细胞的收集和检测
① 颗粒细胞的收集。取卵时收集无血污染卵泡冲洗液，所有穿刺液经2 000 r/min离心10 min，去上清液；细胞沉淀物用磷酸盐缓冲液（PBS）配成悬液，以1︰1的比例将细胞悬液缓慢加入到淋巴细胞分离液上；以2 000 r/min 离心30 min，吸取颗粒细胞层，含有少量红细胞，用红细胞裂解液洗涤、溶解红细胞；最后经PBS洗涤去除红细胞裂解液。将用于实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）的颗粒细胞置于1 mL TRIzol（美国Gibco公司）和5 g大肠埃希菌转录RNA（美国Gibco公司），标本置入-80℃冰柜直至抽提RNA，从样本提取到完成的整个时间为1.0～1.5 h。
② RNA的抽提。用直接从细胞和组织提取总RNA的TRIzol法抽提颗粒细胞RNA，RNA在10～15 μL的焦碳酸二乙酯水溶液中，5 μL的RNA以DNA酶（美国Gibco公司）在10 μL的反应体系中处理15 min，然后用100 U的SuperscripⅡ（美国Gibco公司），在21.5 μL的反应体系中42℃反转录50 min，加入核糖核酸酶H（1.5 U，美国Gibco公司），样本在37℃孵化20 min，直至酶灭活，在聚合酶链式反应（PCR）前逆转录反应以1︰10水稀释。
③ RT-PCR技术。PCR反应体系由10×PCR缓冲液10 μL，4×脱氧核糖核苷三磷酸（各200 μmol/L）215 μL，各引物10 pmoL，模板DNA 2 μg，Taq DNA聚合酶2.5 U，氯化镁溶液1.5 mmol/L加双或三蒸水至100 μL组成。反应条件：预变性94℃，5 min；热循环94℃，30 s；58℃，30 s；72℃，30 s （共38个循环）；终末延伸72℃，10 min。PCR-CR扩增产物以2%琼脂糖凝胶（含溴化乙啶0.5 μg/mL）、100 V电压电泳，30～50 min在紫外线投射仪上观察，并与PCR标准相对分子质量比较。
④ 引物设计。RT-PCR反应所用引物均由上海晶美生物工程公司合成，聚丙烯酰胺凝胶电泳级纯度，引物及预期产物大小见表 1。
⑤ 鼻息肉标本的采集。选取手术后病理诊断为鼻息肉的标本作为阳性对照，组织匀浆后，进行RT-PCR测定，方法同上。
表1
PCOS 相关炎性因子mRNA 的上下游引物及预期产物长度
1.3.2 卵泡液与血清的收集和检测
① 卵泡液的收集。控制性超促排卵周期取卵时收集留取无血污染的优势卵泡（直径≥1.8 cm）的卵泡液，-80℃待测。
② 血清标本的收集。注射hCG当天均空腹采集肘静脉血，室温静置，分离血清，-80℃待测。
③ 检测项目及检测方法。酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清和卵泡液的细胞因子，包括TNF-α、IL-6、IL-8和GRO-α，试剂盒分别购自美国Bender公司和美国R&D Systems公司。
1.4 分层因素
BMI=体质量（kg）/身高2（m2）。由于世界卫生组织的标准中BMI的正常范围为18.5～24.9 kg/m2，因此设定BMI＞25 kg/m2为肥胖，BMI≤25 kg/m2为非肥胖。本研究按是否肥胖分层，对两组进行比较。
1.5 统计学方法
采用SPSS 12.0分析软件进行统计学处理。计量资料采用均数±标准差表示，行独立样本t检验。检验水准α=0.05。
2 结果
2.1 RT-PCR检测卵巢颗粒细胞各细胞因子mRNA的表达
PCOS组与对照组TNF-α mRNA、IL-6 mRNA、IL-8 mRNA、GRO-α mRNA在卵巢颗粒细胞中均有丰富的表达。PCOS组TNF-α mRNA、IL-8 mRNA、GRO-α mRNA在卵巢颗粒细胞中的表达均明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。肥胖者中，PCOS组患者IL-6 mRNA在卵巢颗粒细胞中的表达高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；在非肥胖者中，PCOS组与对照组卵巢颗粒细胞中IL-6 mRNA表达差异无统计学意义（P＞0.05）。见表 2、图 1。
图1
肥胖者卵泡颗粒细胞中GRO-α mRNA表达的RT-PCR电泳图
M：
表2
按是否肥胖分层两组患者颗粒细胞中细胞因子mRNA表达的比较（n=20，2.2 ELISA法检测取卵日卵泡液中细胞因子表达
在取卵日卵泡液中TNF-α、IL-8、GRO-α在PCOS组的表达均明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。肥胖者中，PCOS组患者IL-6在卵泡液中的表达高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；在非肥胖者中，PCOS组与对照组卵泡液中IL-6表达差异无统计学意义（P＞0.05）。见表 3。
表3
按是否肥胖分层两组患者取卵日卵泡液中细胞因子表达的比较（n=20，2.3 ELISA法检测取卵日血清中细胞因子表达
在取卵日血清中TNF-α、IL-8、GRO-α在PCOS组的表达均明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。肥胖者中，PCOS组患者IL-6在血清中的表达高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；在非肥胖者中，PCOS组与对照组血清中IL-6表达差异无统计学意义（P＞0.05）。见表 4。
表4
按是否肥胖分层两组患者取卵日血清中细胞因子表达的比较（n=20，3 讨论
PCOS严重影响妇女身心健康，不仅会导致不孕不育和月经不调，也可致糖尿病、心血管疾病以及子宫内膜癌等疾病发生率上升[10]。2001年Kelly等[3]首次报道PCOS患者体内存在慢性低度炎症状态以来，近年来的研究发现慢性炎症参与PCOS的发生与发展[11]。慢性低度性炎症是由营养物代谢过剩触发的炎症反应，又称为代谢性炎症，其分子及信号通道与传统（低度）的炎症反应相似，可以导致一些慢性代谢性疾病，特别是2型糖尿病、心血管疾病及肥胖的发生[12]。这种亚临床炎症属于自身免疫性炎症和感染性水平以下的炎症，无红肿热痛等局部和全身症状，主要表现为急性相反应产物，IL-6、如C反应蛋白、血浆纤溶酶原激活物抑制物1、单核细胞趋化因子1、TNF-α和IL-18等的增加[13-15]。有研究发现PCOS患者亚临床慢性炎症因子水平升高，并与胰岛素抵抗存在密切关系，慢性炎症通过各种途径介导胰岛素抵抗，并导致高雄激素血症，进一步诱导了PCOS的发生和发展[16]。
GRO生长调节致癌基因家族是一类属于CXC族的趋化因子，包括GRO-α、GRO-β、GRO-γ，系统命名为CXCL1、CXCL2、CXCL3。1987年分离并测序了GRO cDNA，并推测其表达与细胞生长相关，类似于c-fos原癌基因，因此而得名为GRO。此后发现，单核细胞的黏附可导致许多炎症介质基因的表达，其中有1个克隆与原先报道的GRO相似，被命名为GRO-α，GRO与其他CXC族趋化因子如IL-8、中性粒细胞激活蛋白2、上皮中性粒细胞激活肽78、人血小板因子4具有较高同源性[17]。GRO-αmRNA表达增加，局部会出现白细胞浸润其中，出现转录调控NF-κB的紊乱，最终导致了细胞趋化因子在体内的表达异常。有研究发现GRO-α在伤口渗出液和烧伤水疱中有大量的表达，而且TNF-α的表达增加，后者与GRO-α的表达有关[18]。由此推测TNF-α介导PCOS胰岛素抵抗也是通过此途径[19]。本研究发现在PCOS的卵巢颗粒细胞中有GRO-α的大量表达，并且发现在PCOS患者卵巢颗粒细胞卵泡液和血清中GRO-α和IL-8、TNF-α的表达水平升高。推测可能是GRO-α与IL-8上调了TNF-α，导致了炎性反应的发生，最终导致了胰岛素抵抗。
PCOS患者血清IL-6水平是否增高存在争议。IL-6是一种多效能的细胞因子，它主要由免疫细胞分泌，脂肪细胞、肌肉细胞也可分泌，不仅参与造血、骨代谢和能量代谢，亦涉及机体炎症反应[20]。Amato等[21]对31例PCOS不孕患者和自身卵巢功能正常因男性不育而体外授精的39例妇女进行对照研究发现，前者血清中的TNF-α和IL-6浓度均较后者显著增高，提示细胞因子参与了PCOS的发病机制。但也有研究认为PCOS患者IL-6水平并不升高[22]。而本研究发现肥胖者中PCOS妇女卵巢颗粒细胞、血清和卵泡液IL-6水平明显高于对照组，而非肥胖者中两组差异均无统计学意义（P＞0.05），提示BMI是一个关键点，其可能与细胞因子的表达有密切的关系。目前的研究已证实循环中高水平IL-6是发生2型糖尿病和胰岛素抵抗综合征的独立风险因子[23]。IL-6受血糖调节，高血糖可促进胰岛细胞分泌IL-6，而IL-6又可促进B淋巴细胞分化和T淋巴细胞的激活，引起胰岛细胞功能受损，从而诱发胰岛素抵抗。同时高血糖刺激氧化作用和脂类过氧化物作用参与上调炎症基因的表达，诱导细胞炎症因子的产生，进而参与胰岛素抵抗。
综上所述，GRO-α、IL-8、TNF-α、IL-6都与PCOS的发病有关，只是作用环节不同。GRO-α、IL-8是炎症反应的重要标志物，与TNF-α、IL-6相关，调控着TNF-α的表达，起着介导炎症反应的作用，从而导致胰岛素抵抗诱导PCOS的发生和发展[24-25]。本研究是对炎性免疫因素在PCOS发病中作用的初步探索，这为今后深入研究PCOS的病因及对PCOS进行生物治疗打下基础，为今后辅助纠正胰岛素抵抗和高雄状态的治疗的抗炎免疫治疗提供依据。
多囊卵巢综合征（PCOS）是生育年龄妇女常见的内分泌紊乱性疾病。PCOS有复杂的内分泌异常及临床表现：高雄激素血症、胰岛素抵抗及高胰岛素血症、促性腺激素水平异常、月经紊乱、无排卵、多毛、肥胖、不孕合并双侧卵巢增大呈多囊改变[1]。但是PCOS的发病机制到目前为止尚未十分明了，一般认为高雄激素血症、胰岛素抵抗及高胰岛素血症可能是PCOS的发病机制[2]。自Kelly等[3]首次报道PCOS 患者可能存在慢性炎症以来，目前认为慢性炎症可能介导胰岛素抵抗参与PCOS的发生发展。这种慢性炎症不同于细菌、病毒等引起的急性炎症，是一种低度慢性亚临床炎症[4]。生长调节致癌基因（GRO）-α是属于ELR-CXC族的趋化因子，GRO-α参与多种炎性疾病的发生、发展和免疫反应[5]。有研究认为肿瘤坏死因子-α（TNF）-α表达过多，与GRO-α的表达上调有关[6]。本研究通过对PCOS颗粒细胞、卵泡液和血清炎性因子TNF-α、白细胞介素（IL）-6、IL-8和趋化因子GRO-α的表达以及与体质量指数（BMI）关系的探索，探讨慢性炎症在PCOS 发病过程中的可能作用机制。现报告如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
PCOS组：选择2014年1月－8月在四川大学华西第二医院生殖中心行体外受精（IVF）-胚胎移植（ET）的PCOS患者40例，年龄25～35岁，平均（28.1±4.3）岁。PCOS的诊断以2003年10月美国生殖医学学会于荷兰鹿特丹会议上修订的PCOS诊断标准[7]为依据：排卵减少或无排卵；临床或生物化学高雄激素表现；阴道超声每侧卵巢内直径2～9 mm 的卵泡≥12个或卵巢体积10 cm以上；具有以上3项中2项或以上，并排除了先天性肾上腺皮质增生、雄激素分泌肿瘤及库欣病等疾病。
对照组：选择2014年1月－8月在四川大学华西第二医院生殖中心行IVF-ET的不孕患者40例，年龄23～35岁，平均（27.8±4.5）岁，有原发或继发不孕2年以上，月经周期正常，内分泌测定正常；B型超声监测未提示卵巢多囊、子宫肌瘤及子宫内膜异位症等异常声像改变；不孕原因由男性因素或输卵管因素构成。
PCOS组和对照组均已签署知情同意书。因GRO-α在鼻息肉中有显著表达，因此GRO-α阳性标准对照标准选自鼻息肉患者[8-9]。
1.2 超促排卵治疗
PCOS组和对照组均采用IVF长方案，在上一个黄体中期用短效促性腺激素释放激素激动剂（GnRH-a），月经周期第3天用促性腺激素，月经周期第8天开始阴道B型超声检测卵泡的数目、卵泡的直径及子宫内膜的发育情况，当1个卵泡直径≥18 mm，2个或2个以上的卵泡直径≥16 mm时，注射人绒毛膜促性腺激素（hCG）10 000 U后34～36 h取卵。
1.3 标本采集和检测
1.3.1 颗粒细胞的收集和检测
① 颗粒细胞的收集。取卵时收集无血污染卵泡冲洗液，所有穿刺液经2 000 r/min离心10 min，去上清液；细胞沉淀物用磷酸盐缓冲液（PBS）配成悬液，以1︰1的比例将细胞悬液缓慢加入到淋巴细胞分离液上；以2 000 r/min 离心30 min，吸取颗粒细胞层，含有少量红细胞，用红细胞裂解液洗涤、溶解红细胞；最后经PBS洗涤去除红细胞裂解液。将用于实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）的颗粒细胞置于1 mL TRIzol（美国Gibco公司）和5 g大肠埃希菌转录RNA（美国Gibco公司），标本置入-80℃冰柜直至抽提RNA，从样本提取到完成的整个时间为1.0～1.5 h。
② RNA的抽提。用直接从细胞和组织提取总RNA的TRIzol法抽提颗粒细胞RNA，RNA在10～15 μL的焦碳酸二乙酯水溶液中，5 μL的RNA以DNA酶（美国Gibco公司）在10 μL的反应体系中处理15 min，然后用100 U的SuperscripⅡ（美国Gibco公司），在21.5 μL的反应体系中42℃反转录50 min，加入核糖核酸酶H（1.5 U，美国Gibco公司），样本在37℃孵化20 min，直至酶灭活，在聚合酶链式反应（PCR）前逆转录反应以1︰10水稀释。
③ RT-PCR技术。PCR反应体系由10×PCR缓冲液10 μL，4×脱氧核糖核苷三磷酸（各200 μmol/L）215 μL，各引物10 pmoL，模板DNA 2 μg，Taq DNA聚合酶2.5 U，氯化镁溶液1.5 mmol/L加双或三蒸水至100 μL组成。反应条件：预变性94℃，5 min；热循环94℃，30 s；58℃，30 s；72℃，30 s （共38个循环）；终末延伸72℃，10 min。PCR-CR扩增产物以2%琼脂糖凝胶（含溴化乙啶0.5 μg/mL）、100 V电压电泳，30～50 min在紫外线投射仪上观察，并与PCR标准相对分子质量比较。
④ 引物设计。RT-PCR反应所用引物均由上海晶美生物工程公司合成，聚丙烯酰胺凝胶电泳级纯度，引物及预期产物大小见表 1。
⑤ 鼻息肉标本的采集。选取手术后病理诊断为鼻息肉的标本作为阳性对照，组织匀浆后，进行RT-PCR测定，方法同上。
表1
PCOS 相关炎性因子mRNA 的上下游引物及预期产物长度
1.3.2 卵泡液与血清的收集和检测
① 卵泡液的收集。控制性超促排卵周期取卵时收集留取无血污染的优势卵泡（直径≥1.8 cm）的卵泡液，-80℃待测。
② 血清标本的收集。注射hCG当天均空腹采集肘静脉血，室温静置，分离血清，-80℃待测。
③ 检测项目及检测方法。酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清和卵泡液的细胞因子，包括TNF-α、IL-6、IL-8和GRO-α，试剂盒分别购自美国Bender公司和美国R&D Systems公司。
1.4 分层因素
BMI=体质量（kg）/身高2（m2）。由于世界卫生组织的标准中BMI的正常范围为18.5～24.9 kg/m2，因此设定BMI＞25 kg/m2为肥胖，BMI≤25 kg/m2为非肥胖。本研究按是否肥胖分层，对两组进行比较。
1.5 统计学方法
采用SPSS 12.0分析软件进行统计学处理。计量资料采用均数±标准差表示，行独立样本t检验。检验水准α=0.05。
2 结果
2.1 RT-PCR检测卵巢颗粒细胞各细胞因子mRNA的表达
PCOS组与对照组TNF-α mRNA、IL-6 mRNA、IL-8 mRNA、GRO-α mRNA在卵巢颗粒细胞中均有丰富的表达。PCOS组TNF-α mRNA、IL-8 mRNA、GRO-α mRNA在卵巢颗粒细胞中的表达均明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。肥胖者中，PCOS组患者IL-6 mRNA在卵巢颗粒细胞中的表达高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；在非肥胖者中，PCOS组与对照组卵巢颗粒细胞中IL-6 mRNA表达差异无统计学意义（P＞0.05）。见表 2、图 1。
图1
肥胖者卵泡颗粒细胞中GRO-α mRNA表达的RT-PCR电泳图
M：
表2
按是否肥胖分层两组患者颗粒细胞中细胞因子mRNA表达的比较（n=20，2.2 ELISA法检测取卵日卵泡液中细胞因子表达
在取卵日卵泡液中TNF-α、IL-8、GRO-α在PCOS组的表达均明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。肥胖者中，PCOS组患者IL-6在卵泡液中的表达高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；在非肥胖者中，PCOS组与对照组卵泡液中IL-6表达差异无统计学意义（P＞0.05）。见表 3。
表3
按是否肥胖分层两组患者取卵日卵泡液中细胞因子表达的比较（n=20，2.3 ELISA法检测取卵日血清中细胞因子表达
在取卵日血清中TNF-α、IL-8、GRO-α在PCOS组的表达均明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。肥胖者中，PCOS组患者IL-6在血清中的表达高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；在非肥胖者中，PCOS组与对照组血清中IL-6表达差异无统计学意义（P＞0.05）。见表 4。
表4
按是否肥胖分层两组患者取卵日血清中细胞因子表达的比较（n=20，3 讨论
PCOS严重影响妇女身心健康，不仅会导致不孕不育和月经不调，也可致糖尿病、心血管疾病以及子宫内膜癌等疾病发生率上升[10]。2001年Kelly等[3]首次报道PCOS患者体内存在慢性低度炎症状态以来，近年来的研究发现慢性炎症参与PCOS的发生与发展[11]。慢性低度性炎症是由营养物代谢过剩触发的炎症反应，又称为代谢性炎症，其分子及信号通道与传统（低度）的炎症反应相似，可以导致一些慢性代谢性疾病，特别是2型糖尿病、心血管疾病及肥胖的发生[12]。这种亚临床炎症属于自身免疫性炎症和感染性水平以下的炎症，无红肿热痛等局部和全身症状，主要表现为急性相反应产物，IL-6、如C反应蛋白、血浆纤溶酶原激活物抑制物1、单核细胞趋化因子1、TNF-α和IL-18等的增加[13-15]。有研究发现PCOS患者亚临床慢性炎症因子水平升高，并与胰岛素抵抗存在密切关系，慢性炎症通过各种途径介导胰岛素抵抗，并导致高雄激素血症，进一步诱导了PCOS的发生和发展[16]。
GRO生长调节致癌基因家族是一类属于CXC族的趋化因子，包括GRO-α、GRO-β、GRO-γ，系统命名为CXCL1、CXCL2、CXCL3。1987年分离并测序了GRO cDNA，并推测其表达与细胞生长相关，类似于c-fos原癌基因，因此而得名为GRO。此后发现，单核细胞的黏附可导致许多炎症介质基因的表达，其中有1个克隆与原先报道的GRO相似，被命名为GRO-α，GRO与其他CXC族趋化因子如IL-8、中性粒细胞激活蛋白2、上皮中性粒细胞激活肽78、人血小板因子4具有较高同源性[17]。GRO-αmRNA表达增加，局部会出现白细胞浸润其中，出现转录调控NF-κB的紊乱，最终导致了细胞趋化因子在体内的表达异常。有研究发现GRO-α在伤口渗出液和烧伤水疱中有大量的表达，而且TNF-α的表达增加，后者与GRO-α的表达有关[18]。由此推测TNF-α介导PCOS胰岛素抵抗也是通过此途径[19]。本研究发现在PCOS的卵巢颗粒细胞中有GRO-α的大量表达，并且发现在PCOS患者卵巢颗粒细胞卵泡液和血清中GRO-α和IL-8、TNF-α的表达水平升高。推测可能是GRO-α与IL-8上调了TNF-α，导致了炎性反应的发生，最终导致了胰岛素抵抗。
PCOS患者血清IL-6水平是否增高存在争议。IL-6是一种多效能的细胞因子，它主要由免疫细胞分泌，脂肪细胞、肌肉细胞也可分泌，不仅参与造血、骨代谢和能量代谢，亦涉及机体炎症反应[20]。Amato等[21]对31例PCOS不孕患者和自身卵巢功能正常因男性不育而体外授精的39例妇女进行对照研究发现，前者血清中的TNF-α和IL-6浓度均较后者显著增高，提示细胞因子参与了PCOS的发病机制。但也有研究认为PCOS患者IL-6水平并不升高[22]。而本研究发现肥胖者中PCOS妇女卵巢颗粒细胞、血清和卵泡液IL-6水平明显高于对照组，而非肥胖者中两组差异均无统计学意义（P＞0.05），提示BMI是一个关键点，其可能与细胞因子的表达有密切的关系。目前的研究已证实循环中高水平IL-6是发生2型糖尿病和胰岛素抵抗综合征的独立风险因子[23]。IL-6受血糖调节，高血糖可促进胰岛细胞分泌IL-6，而IL-6又可促进B淋巴细胞分化和T淋巴细胞的激活，引起胰岛细胞功能受损，从而诱发胰岛素抵抗。同时高血糖刺激氧化作用和脂类过氧化物作用参与上调炎症基因的表达，诱导细胞炎症因子的产生，进而参与胰岛素抵抗。
综上所述，GRO-α、IL-8、TNF-α、IL-6都与PCOS的发病有关，只是作用环节不同。GRO-α、IL-8是炎症反应的重要标志物，与TNF-α、IL-6相关，调控着TNF-α的表达，起着介导炎症反应的作用，从而导致胰岛素抵抗诱导PCOS的发生和发展[24-25]。本研究是对炎性免疫因素在PCOS发病中作用的初步探索，这为今后深入研究PCOS的病因及对PCOS进行生物治疗打下基础，为今后辅助纠正胰岛素抵抗和高雄状态的治疗的抗炎免疫治疗提供依据。
