引用本文： 陈姣, 黄茜, 丁彬, 毛志刚, 粟军. Sysmex XT-4000i 全血细胞分析仪在体液细胞计数及分类中的应用. 华西医学, 2017, 32(4): 563-566. doi: 10.7507/1002-0179.201601134 复制
胸腹腔积液及脑脊液常规检查对于临床上的疾病诊断、治疗及预后有着重要的意义，现今所使用的方法多为人工计数法。人工计数法多为手工显微镜法，操作时带有很大的主观性和经验性，操作费时、繁琐，难以满足临床的工作需求。很多临床检验项目已经由传统的手工操作转向仪器自动化操作。Sysmex XT-4000i 全血细胞分析仪本身带有体液模式，可以对胸腹腔积液及脑脊液进行计数、分类，但并未在临床进行论证及推广，其准确性受诸多因素影响。仪器法进行流式细胞计数具有便捷、高效、适合大批量标本操作的特点。目前有很多关于仪器法进行体液细胞计数的研究[1-3]。我们对 2015年5月—9月采集的95 份标本使用 Sysmex XT-4000i 全血细胞分析仪体液模式及手工法分别进行计数和比较，评价其在胸腹腔积液及脑脊液细胞计数中的应用性。现报告如下。
1 材料与方法
1.1 标本来源
采集 2015 年 5 月—9 月四川大学华西医院住院患者体液标本共 95 份，包括胸腔积液 42 份，腹腔积液 21 份，脑脊液 26 份，透析液 4 份，穿刺液 2 份；置于无菌容器中送检并于 4 h 内完成检测。
1.2 仪器及试剂
Sysmex XT-4000i 全血细胞分析仪体液模式及其配套校准品、质量控制（质控）品和检测试剂；改良牛鲍计数板，奥林巴斯普通光学显微镜 CX21；冰醋酸。所有试剂均参照四川大学华西医院实验医学科临床检验血液室标准化操作规程进行配制。
1.3 检测方法
纳入的所有标本均同时采用仪器法和手工法两种方法检测计数，并比较两种方法检测结果的差异。
仪器法：参照全血细胞分析仪体液模式的操作说明完成，使用 Sysmex 配套校准品 SCS-1000 进行校准，用配套高、中-水平质控品进行室内质控，各检测参数结果均在控方可进行标本检测，分别记录有核细胞数、红细胞数、有核细胞分类计数（单个核细胞和多个核细胞百分比）。
手工法：参照四川大学华西医院实验医学科临床检验血液室标准化操作规程进行操作，将标本混匀后吸取适量进行充池，静置 5 min，用普通光学显微镜分别计数牛鲍计数板上、下 2 个计数区域内的四角及中央共 10 个大格内的有核细胞和红细胞。有核细胞分类计数采用冰醋酸处理破坏红细胞后，分别计数单个核细胞、多个核细胞及间皮细胞百分比。所有操作均由同一人按照标准化操作执行[4]。仪器法中单个核细胞比例=手工法中单个核细胞比例+间皮细胞比例。
1.4 统计学方法
采用 SPSS 20.0 软件进行统计分析。对两种方法的有核细胞计数及红细胞计数结果进行 kappa 一致性检验，有核细胞分类计数进行配对t 检验。检验水准α=0.05。
2 结果
2.1 手工法与仪器法体液标本有核细胞与红细胞计数结果比较
手工法与仪器法体液标本有核细胞计数一致性较好（kappa=0.965，P<0.001）；手工法与仪器法体液标本红细胞计数一致性较好（kappa=0.988，P<0.001）。见表 1 及图 1、2。
表1
两种方法体液标本有核细胞及红细胞计数结果比较（
n=95，
）
图1
手工法与仪器法体液标本有核细胞计数结果比较散点图
图2
手工法与仪器法体液标本红细胞计数结果比较散点图
2.2 手工法与仪器法体液标本有核细胞分类计数
手工法与仪器法体液标本有核细胞分类计数中，单个核细胞计数结果差异无统计学意义（P>0.05），而多个核细胞计数结果差异有统计学意义（P<0.05）。见表 2。
表2
手工法与仪器法体液标本有核细胞分类计数结果比较
3 讨论
胸腹腔积液及脑脊液细胞计数作为临床常规检测项目，有助于临床医生了解患者身体感染、出血等情况，同时有助于判断渗出性质、及时对患者进行处理。目前手工计数仍是体液细胞计数最常用的方法，也是金标准[5]。但手工法技术误差大，重复性差，而且耗时费力，不易于大批量操作。随着检验自动化程度的不断提高，越来越多的检测项目可以借助仪器自动完成。仪器法具有人为误差小、效率高、精密度高、易于大批量操作等优点。应用血细胞分析仪进行胸腹腔积液及脑脊液细胞计数，不仅提高了效率，也利于检验自动化。目前已经有很多关于体液细胞计数自动化方面的研究[6]。但仪器法进行体液细胞计数并未在临床进行论证及推广，这归因于体液类型复杂、体液基本状况差异大等多种因素[7]，血液和体液基质成分的差别也使得结果准确性受到影响[8]，虽然 Sysmex XT-4000i 的体液模式有单独的通道，但还是易引起机器的堵塞[9]。
本研究的主要目的是评价 Sysmex XT-4000i 全血细胞分析仪体液模式在胸腹腔积液及脑脊液标本细胞计数及分类计数中的应用价值，结果显示：① 手工法与仪器法体液标本有核细胞计数及红细胞计数一致性较好（kappa=0.965，P<0.001；kappa=0.988，P<0.001。），说明 Sysmex XT-4000i 的体液模式在有核细胞计数和红细胞的计数上是可行的。有核细胞分类计数中单个核细胞计数结果两种方法差异无统计学意义（P>0.05），而多个核细胞计数结果差异有统计学意义（P<0.05）。说明尽管仪器对于红细胞、白细胞总数的计数与经典牛鲍计数板手工相比较无太大差异，但是对于白细胞分类和单核细胞、多核细胞的分类存在较大的差异，同时仪器对于大细胞、异常细胞的辨识度不够。仪器法在有核细胞分类计数方面相关性较差，这可能和两种方法分类标准不一致有关，仪器法只能对包括淋巴细胞和单核细胞在内的单个核细胞和多个核细胞进行简单的分类，对于间质细胞、内皮细胞、异常细胞的辨识度存在很大的差异。② 前一个分析结果高出阈值时，仪器对于背景的清洗时间过长，不利于临床上的应用。③ Sysmex XT-4000i 主要应用于血液上的分析，如果要进行体液模式检查胸腹腔积液和脑脊液，模式之间的切换是个问题，反而会花费过长的时间，导致临床检测时间过长。④ 仪器在体液模式下，怀疑仪器对于一些小结晶、小颗粒存在错误辨识，导致结果失真。⑤ 在人工审核时，质控很关键，结果的真实度存在很大的问题。
目前有很多关于仪器法进行体液细胞计数方面的研究。有研究对 Sysmex XE-5000 全自动血液分析仪体液模式进行有核细胞计数和 BD FACSCalibur 流式细胞仪进行白细胞计数进行比较，结果显示两种方法的白细胞计数具有很好的相关性[10]。在对不同厂家不同型号仪器的体液模式与手工显微镜计数结果分析比较发现，仪器法在红细胞计数、白细胞计数方面与手工法一致性良好，但也有文献报道 Mindray BC-6800 的体液模式在异常细胞分类计数中识别能力较差需要显微镜检查补充[11-13]。也有研究显示，仪器法细胞计数并不适合用于所有体液标本，血性的体液标本两种方法有很高的相关性，但非血性的体液标本则差异较大[14]。而且体液中若有凝块，其准确性将大大减低[15]。若体液中细胞数量超过一定的阈值，其准确度也不可信[16-17]。
综上所述，使用全血细胞分析仪进行胸腹腔积液和脑脊液细胞计数，虽然更方便快速、精密度高，但结果的真实度存在很大的问题，对特殊异常细胞不易察觉，且对标本的性质有一定的限制，检测结果受多方面影响，而且会花费更长的时间。所以目前认为全血细胞分析仪体液模式可能用于部分物理性状较好的常规体液标本的细胞计数，但细胞分类计数结果还需要显微镜检查辅助。
胸腹腔积液及脑脊液常规检查对于临床上的疾病诊断、治疗及预后有着重要的意义，现今所使用的方法多为人工计数法。人工计数法多为手工显微镜法，操作时带有很大的主观性和经验性，操作费时、繁琐，难以满足临床的工作需求。很多临床检验项目已经由传统的手工操作转向仪器自动化操作。Sysmex XT-4000i 全血细胞分析仪本身带有体液模式，可以对胸腹腔积液及脑脊液进行计数、分类，但并未在临床进行论证及推广，其准确性受诸多因素影响。仪器法进行流式细胞计数具有便捷、高效、适合大批量标本操作的特点。目前有很多关于仪器法进行体液细胞计数的研究[1-3]。我们对 2015年5月—9月采集的95 份标本使用 Sysmex XT-4000i 全血细胞分析仪体液模式及手工法分别进行计数和比较，评价其在胸腹腔积液及脑脊液细胞计数中的应用性。现报告如下。
1 材料与方法
1.1 标本来源
采集 2015 年 5 月—9 月四川大学华西医院住院患者体液标本共 95 份，包括胸腔积液 42 份，腹腔积液 21 份，脑脊液 26 份，透析液 4 份，穿刺液 2 份；置于无菌容器中送检并于 4 h 内完成检测。
1.2 仪器及试剂
Sysmex XT-4000i 全血细胞分析仪体液模式及其配套校准品、质量控制（质控）品和检测试剂；改良牛鲍计数板，奥林巴斯普通光学显微镜 CX21；冰醋酸。所有试剂均参照四川大学华西医院实验医学科临床检验血液室标准化操作规程进行配制。
1.3 检测方法
纳入的所有标本均同时采用仪器法和手工法两种方法检测计数，并比较两种方法检测结果的差异。
仪器法：参照全血细胞分析仪体液模式的操作说明完成，使用 Sysmex 配套校准品 SCS-1000 进行校准，用配套高、中-水平质控品进行室内质控，各检测参数结果均在控方可进行标本检测，分别记录有核细胞数、红细胞数、有核细胞分类计数（单个核细胞和多个核细胞百分比）。
手工法：参照四川大学华西医院实验医学科临床检验血液室标准化操作规程进行操作，将标本混匀后吸取适量进行充池，静置 5 min，用普通光学显微镜分别计数牛鲍计数板上、下 2 个计数区域内的四角及中央共 10 个大格内的有核细胞和红细胞。有核细胞分类计数采用冰醋酸处理破坏红细胞后，分别计数单个核细胞、多个核细胞及间皮细胞百分比。所有操作均由同一人按照标准化操作执行[4]。仪器法中单个核细胞比例=手工法中单个核细胞比例+间皮细胞比例。
1.4 统计学方法
采用 SPSS 20.0 软件进行统计分析。对两种方法的有核细胞计数及红细胞计数结果进行 kappa 一致性检验，有核细胞分类计数进行配对t 检验。检验水准α=0.05。
2 结果
2.1 手工法与仪器法体液标本有核细胞与红细胞计数结果比较
手工法与仪器法体液标本有核细胞计数一致性较好（kappa=0.965，P<0.001）；手工法与仪器法体液标本红细胞计数一致性较好（kappa=0.988，P<0.001）。见表 1 及图 1、2。
表1
两种方法体液标本有核细胞及红细胞计数结果比较（
n=95，
）
图1
手工法与仪器法体液标本有核细胞计数结果比较散点图
图2
手工法与仪器法体液标本红细胞计数结果比较散点图
2.2 手工法与仪器法体液标本有核细胞分类计数
手工法与仪器法体液标本有核细胞分类计数中，单个核细胞计数结果差异无统计学意义（P>0.05），而多个核细胞计数结果差异有统计学意义（P<0.05）。见表 2。
表2
手工法与仪器法体液标本有核细胞分类计数结果比较
3 讨论
胸腹腔积液及脑脊液细胞计数作为临床常规检测项目，有助于临床医生了解患者身体感染、出血等情况，同时有助于判断渗出性质、及时对患者进行处理。目前手工计数仍是体液细胞计数最常用的方法，也是金标准[5]。但手工法技术误差大，重复性差，而且耗时费力，不易于大批量操作。随着检验自动化程度的不断提高，越来越多的检测项目可以借助仪器自动完成。仪器法具有人为误差小、效率高、精密度高、易于大批量操作等优点。应用血细胞分析仪进行胸腹腔积液及脑脊液细胞计数，不仅提高了效率，也利于检验自动化。目前已经有很多关于体液细胞计数自动化方面的研究[6]。但仪器法进行体液细胞计数并未在临床进行论证及推广，这归因于体液类型复杂、体液基本状况差异大等多种因素[7]，血液和体液基质成分的差别也使得结果准确性受到影响[8]，虽然 Sysmex XT-4000i 的体液模式有单独的通道，但还是易引起机器的堵塞[9]。
本研究的主要目的是评价 Sysmex XT-4000i 全血细胞分析仪体液模式在胸腹腔积液及脑脊液标本细胞计数及分类计数中的应用价值，结果显示：① 手工法与仪器法体液标本有核细胞计数及红细胞计数一致性较好（kappa=0.965，P<0.001；kappa=0.988，P<0.001。），说明 Sysmex XT-4000i 的体液模式在有核细胞计数和红细胞的计数上是可行的。有核细胞分类计数中单个核细胞计数结果两种方法差异无统计学意义（P>0.05），而多个核细胞计数结果差异有统计学意义（P<0.05）。说明尽管仪器对于红细胞、白细胞总数的计数与经典牛鲍计数板手工相比较无太大差异，但是对于白细胞分类和单核细胞、多核细胞的分类存在较大的差异，同时仪器对于大细胞、异常细胞的辨识度不够。仪器法在有核细胞分类计数方面相关性较差，这可能和两种方法分类标准不一致有关，仪器法只能对包括淋巴细胞和单核细胞在内的单个核细胞和多个核细胞进行简单的分类，对于间质细胞、内皮细胞、异常细胞的辨识度存在很大的差异。② 前一个分析结果高出阈值时，仪器对于背景的清洗时间过长，不利于临床上的应用。③ Sysmex XT-4000i 主要应用于血液上的分析，如果要进行体液模式检查胸腹腔积液和脑脊液，模式之间的切换是个问题，反而会花费过长的时间，导致临床检测时间过长。④ 仪器在体液模式下，怀疑仪器对于一些小结晶、小颗粒存在错误辨识，导致结果失真。⑤ 在人工审核时，质控很关键，结果的真实度存在很大的问题。
目前有很多关于仪器法进行体液细胞计数方面的研究。有研究对 Sysmex XE-5000 全自动血液分析仪体液模式进行有核细胞计数和 BD FACSCalibur 流式细胞仪进行白细胞计数进行比较，结果显示两种方法的白细胞计数具有很好的相关性[10]。在对不同厂家不同型号仪器的体液模式与手工显微镜计数结果分析比较发现，仪器法在红细胞计数、白细胞计数方面与手工法一致性良好，但也有文献报道 Mindray BC-6800 的体液模式在异常细胞分类计数中识别能力较差需要显微镜检查补充[11-13]。也有研究显示，仪器法细胞计数并不适合用于所有体液标本，血性的体液标本两种方法有很高的相关性，但非血性的体液标本则差异较大[14]。而且体液中若有凝块，其准确性将大大减低[15]。若体液中细胞数量超过一定的阈值，其准确度也不可信[16-17]。
综上所述，使用全血细胞分析仪进行胸腹腔积液和脑脊液细胞计数，虽然更方便快速、精密度高，但结果的真实度存在很大的问题，对特殊异常细胞不易察觉，且对标本的性质有一定的限制，检测结果受多方面影响，而且会花费更长的时间。所以目前认为全血细胞分析仪体液模式可能用于部分物理性状较好的常规体液标本的细胞计数，但细胞分类计数结果还需要显微镜检查辅助。
