PKH26标记结合活体荧光成像技术在椎间盘组织工程研究中的应用_《中国修复重建外科杂志》

作者：

伍耀宏 ¹ , 徐宝山 ¹ , 杨强 ¹ , 李秀兰 ² , 张杨马信龙 ²¹ , 夏群 ¹ , 张春秋 ³ , 许海委 ¹ , 曾超 ¹

天津医院（天津，300211）1脊柱外科，2骨科研究所细胞工程室;;
3天津理工大学机械工程学院;

关键词：

椎间盘组织工程 PKH26 活体荧光成像技术山羊

DOI：

10.7507/1002-1892.20130045

视频：

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目的体外评估PKH26标记对山羊髓核细胞生物学功能的影响，并结合活体荧光成像系统评价种子细胞在裸鼠体内的生物学行为。方法取1岁龄山羊椎间盘分离髓核组织，通过酶消化法获取原代细胞，倒置相差显微镜下观察，传代获取第1代髓核细胞，行PKH26荧光标记，荧光显微镜下观察标记后的细胞荧光强度，并行甲苯胺蓝和Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色观察，锥虫蓝染色比较标记前后细胞活性，MTT法检测标记前后细胞增殖特性，实时荧光定量PCR检测细胞Ⅰ、Ⅱ型胶原及蛋白聚糖基因表达。将标记后的髓核细胞接种至一体化纤维化-髓核支架的髓核部分，纤维环部分作为阴性对照，体外培养3 d后植入5只6周龄雄性裸鼠体内，培养6周后活体成像技术检测髓核细胞-支架复合物在体内的荧光强度及范围。结果倒置相差显微镜观察示原代髓核细胞簇状生长，呈卵圆形，第1代髓核细胞呈类软骨样细胞形态；标记后的第1代髓核细胞甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色均呈阳性；标记后荧光强度均匀，标记前后细胞活性均在95%以上；标记前后细胞生长曲线比较差异无统计学意义（P gt; 0.05）；实时荧光定量PCR检测示标记前后细胞Ⅰ、Ⅱ型胶原和蛋白聚糖基因相对表达量差异均无统计学意义（P gt; 0.05）。活体成像技术显示体内髓核支架有强烈荧光，纤维环支架未见荧光。结论 PKH26标记对髓核细胞的活性、增殖及细胞表型的表达无明显影响，结合体内活体荧光成像系统可以追踪细胞在体内的生物学行为。

引用本文： 伍耀宏,徐宝山,杨强,李秀兰,张杨马信龙,夏群,张春秋,许海委,曾超. PKH26标记结合活体荧光成像技术在椎间盘组织工程研究中的应用. 中国修复重建外科杂志, 2013, 27(2): 207-211. doi: 10.7507/1002-1892.20130045 复制

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