引用本文： 刘鲁, 金利新, 杨洁茹, 吴滨滨, 张益萌, 韩彦弢, 王春波, 邢立峰. 狭鳕鱼皮胶原多肽对去势大鼠骨微结构影响的研究. 中国修复重建外科杂志, 2017, 31(10): 1214-1219. doi: 10.7507/1002-1892.201704130 复制
骨质疏松症是一种全身性骨骼疾病，其特征是骨量丢失、骨微结构改变、骨组织脆性增加，导致骨折发生风险增加[1-2]。据近期统计，全世界大约有 20 亿骨质疏松患者，仅在美国就有约 2 400 万人，其每年约有 150 万名患者发生骨折[3]；因此，骨质疏松症也成为了当今社会不容忽视的健康问题之一。目前雌激素替代疗法是预防和治疗骨质疏松症的首选方案[4]，但长期服用雌激素毒副作用较大。因而，研究毒副作用小、效果显著的治疗方法具有重要临床意义。研究发现，胶原蛋白肽对骨质疏松症有一定治疗作用，包括：① 刺激成骨细胞合成，降低破骨细胞活性，增强骨形成，改善骨微结构；② 维持骨组织密度；③ 扩大骨皮质面积，增强骨骼强度；④ 降低骨吸收程度[5]。目前研究的胶原蛋白肽主要从阿胶中提取，阿胶是从驴皮中提取出的一种胶原蛋白[6-7]，能够促进成骨细胞增殖与分化[8]，增加骨中钙、磷含量及骨质密度。狭鳕鱼皮胶原多肽同样属于小分子多肽，是狭鳕鱼皮经酶解提纯后获得的胶原蛋白肽，其是否具有抗骨质疏松作用尚未见确切报道。为此，我们采用去势大鼠骨质疏松模型，通过观察大鼠骨组织形态学、骨形态计量学参数以及降钙素受体（caltitonin receptor，CTR）、IL-1 的变化，探究狭鳕鱼皮胶原多肽对绝经后骨质疏松症的治疗作用。报告如下。
1 材料与方法
1.1 实验动物及主要试剂、仪器
SPF 级成年 Wistar 雌性大鼠 60 只，体质量（250±10）g，由青岛派特福德白鼠养殖专业合作社提供。狭鳕鱼皮胶原多肽（青岛福生食品有限公司）。4% 多聚甲醛（天津光复精细化研究所）；水合氯醛（天津瑞金特化学品有限公司）；EDTA-2Na（北京索莱宝生物科技有限公司）；CTR 测定试剂盒、IL-1 测定试剂盒（武汉博士德生物工程有限公司）。
RM2016 切片机（上海徕卡仪器有限公司）；电子天平（上海奥豪斯公司）；DNP-9162 电热恒温培养箱（上海三发科学仪器有限公司）；光学显微镜（Olympus 公司，日本）；Image-Pro Plus 6.0 软件（Media Cybernetics 公司，美国）。
1.2 实验分组及方法
将 60 只 Wistar 雌性大鼠随机分为 5 组，每组 12 只，分别为正常对照组（A 组）、骨质疏松模型组（B 组）、骨质疏松模型+狭鳕鱼皮胶原多肽预防组（C 组）、骨质疏松模型+狭鳕鱼皮胶原多肽低剂量治疗组（D 组）、骨质疏松模型+狭鳕鱼皮胶原多肽高剂量治疗组（E 组）。A 组大鼠不制备模型。B、C、D、E 组采用摘除双侧卵巢法建立去势大鼠骨质疏松模型。腹腔注射 3% 水合氯醛麻醉后，无菌条件下切除大鼠双侧卵巢，局部涂撒青霉素粉，预防感染，关闭切口。术后 7 d 每天腹腔注青霉素 0.2～0.3 mL。
C 组从术前 4 周开始，每天按照 1.0 g/kg 行狭鳕鱼皮胶原多肽灌胃，直至术后 6 周。D、E 组从术后 6 周开始每天分别按照 0.5 g/kg 和 1.0 g/kg 行狭鳕鱼皮胶原多肽灌胃，连续 6 周。A、B 组于术后同时间点给予等体积生理盐水灌胃。末次给药后 24 h，取各组大鼠同上法麻醉后进行观测。
1.3 观测指标
1.3.1 一般情况 观察各组大鼠存活情况以及术后大鼠毛发、精神、活动、反应及饮食情况。
1.3.2 大鼠股骨灰度值测定 取 A、B 组大鼠以仰卧位固定，摄股骨 X 线片，采用 Image-Pro Plus 6.0 软件测定其灰度值。
1.3.3 组织学观察 取各组大鼠左侧胫骨近端 1/3 骨组织，置于 4% 多聚甲醛固定 48 h，10%EDTA-2Na 微波脱钙，石蜡包埋，切片，片厚 5 μm。取部分切片常规 HE 染色，光镜下观察骨小梁吸收陷窝变化。于 100 倍镜下，以生长板下 1～4 mm 近皮质处为测量范围，每张切片随机选取 3 个视野，采用 Image-Pro Plus 6.0 软件测算骨组织形态计量学参数[9]，包括骨小梁数量（trabecular number，TN）、平均骨小梁厚度（mean trabecular plate thickness，MTPT）、平均骨小梁间距（mean trabecular plate spacing，MTPS）、骨小梁体积百分比（trabecular bone volume，TBV）、平均骨皮质厚度（mean bone cortical thickness，MBCT），取均值。
1.3.4 免疫组织化学染色 取各组剩余切片脱蜡至水，0.1% 胰蛋白酶抗原修复 25 min，PBS 漂洗 3 次（5 min/次），3%H2O2 消化 10 min，过氧化酶室温孵育 10 min，PBS 漂洗 3 次（5 min/次），将一抗（兔抗大鼠 CTR 多克隆抗体和兔抗大鼠 IL-1 多克隆抗体），按 1∶200 比例配制后加入抗体稀释液中，滴加至切片，37℃ 孵育 1 h，4℃ 过夜；PBS 漂洗 3 次（5 min/次），加入山羊抗兔 IgG 二抗，37℃ 孵育 1 h，PBS 漂洗 3 次（5 min/次），DAB 染色，自来水冲洗，苏木素复染，自来水冲洗 4 次，脱水、二甲苯透明、封片。光镜下观察，细胞质呈棕黄色颗粒者为阳性细胞。于 400 倍镜下，取不重叠的 4 个视野，采用 Image-Pro Plus 6.0 软件计算阳性细胞积分吸光度（IA）值，取均值。
1.4 统计学方法
采用 SPSS22.0 统计软件进行分析。数据以均数±标准差表示，两组间比较采用独立样本t 检验；多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用 LSD 检验；检验水准 α=0.05。
2 结果
2.1 一般情况
术中 5 只大鼠死亡，其中 B 组 2 只、C 组 2 只、E 组 1 只；术后感染死亡 2 只，A、B 组各 1 只；因灌胃误入气管死亡 5 只，其中 C 组 1 只、D 组 2 只、E 组 2 只；其余大鼠均存活至实验完成。术后 B 组大鼠毛发稀疏，精神萎靡，行动缓慢，反应迟钝，饮食变差；A、C、D、E 组大鼠毛发均光亮顺滑，精神、活动、反应均正常、饮食良好。
2.2 大鼠股骨灰度值测定
A、B 组大鼠股骨灰度值分别为 110.12±2.01、65.36±2.43，比较差异有统计学意义（t=45.130，P=0.000），表明去势大鼠骨质疏松模型制备成功。
2.3 组织学观察
镜下观察见，B 组骨小梁吸收陷窝较其余组明显增多、增大。E 组较 D 组骨小梁吸收陷窝数目减少、骨小梁吸收陷窝减小；与 C 组相比无明显差异。见图 1。骨组织形态计量学参数比较：A、C、E 组 TN、MTPS、TBV、MBCT 与 B 组比较，差异有统计学意义（P<0.05）；MTPT 与 B 组比较差异无统计学意义（P>0.05）。D 组仅 MTPS 和 TBV 与 B 组比较差异有统计学意义（P<0.05）。C 组各骨组织形态计量学参数与 D、E 组比较，差异均有统计学意义（P<0.05）；C 组与 A 组比较，除 TN 外，其余各指标比较差异均有统计学意义（P<0.05）。 D、E 组与 A 组比较，仅 D 组 TN、MBCT、MTPS、TBV 及 E 组 MTPS 差异有统计学意义（P<0.05），其余指标比较差异均无统计学意义（P>0.05）。D、E 组间仅 MTPS、TBV、MBCT 比较差异有统计学意义（P<0.05），TN、MTPT 比较差异无统计学意义（P>0.05）。见表 1。
图1
各组组织学观察（HE×400）
箭头示骨小梁吸收陷窝 a. A 组；b. B 组；c. C 组；d. D 组；e. E 组
Figure1. Histological observation of each group (HE×400)Arrow indicated trabecular bone a. Group A; b. Group B; c. Group C; d. Group D; e. Group E
表1
各组大鼠骨组织形态计量学参数比较（
）
Table1.
Comparison of histological parameters of bone tissue between groups (
)
2.4 免疫组织化学染色观察
A、C、D、E 组 CTR、IL-1 表达水平较 B 组降低，C、E 组低于 D 组，差异有统计学意义（P<0.05）；其余组间比较差异均无统计学意义（P>0.05）。见图 2、3 及表 2。
表2
各组 CTR 及 IL-1 表达水平比较（
）
Table2.
Comparisonof the expression levels of CTR and IL-1 bet-ween groups (
)
图2
各组 CTR 免疫组织化学染色观察（DAB×400）
箭头示阳性细胞 a. A 组；b. B 组；c. C 组；d. D 组；e. E 组
Figure2. Immunohistochemical staining of CTR in each group (DAB×400)Arrow indicated positive cells a. Group A; b. Group B; c. Group C; d. Group D; e. Group E
图3
各组 IL-1 免疫组织化学染色观察（DAB×400）
箭头示阳性细胞 a. A 组；b. B 组；c. C 组；d. D 组；e. E 组
Figure3. Immunohistochemical staining of IL-1 in each group (DAB×400)Arrow indicated positive cells a. Group A; b. Group B; c. Group C; d. Group D; e. Group E
3 讨论
狭鳕鱼皮胶原多肽是狭鳕鱼皮经酶解法获得的小分子量多肽，符合国家对水产胶原蛋白粉的要求[10]，研究表明其具有抗氧化、保护成骨细胞[11]、促进钙吸收的作用[12]。另外，有报道指出狭鳕鱼皮胶原蛋白多肽还可用于矿物质缺乏症、高血压、糖尿病等慢性病的治疗[13]。骨组织形态计量学作为一项重要的参考指标，可对骨显微结构进行精确定量分析，尤其是对骨小梁网状系统、骨基质结构、骨表面、骨间质和骨转换进行精确描述，有助于揭示骨组织生理与病理的改变。结果表明，与 B 组比较，C、E 组 TN、TBV、MBCT 均明显升高，MTPS 明显减小，且 C 组优于 E 组。由此可见，狭鳕鱼皮胶原多肽能够增加骨组织中骨小梁数量，增强骨韧性，防止骨基质丢失，减轻骨组织损伤。
骨骼构建是骨形成和骨吸收作用过程，而这一过程主要与成骨细胞和破骨细胞的相互作用有关。当骨吸收强于骨形成时，引起骨量丢失，严重时则引发骨质疏松。目前已证实有多种因子参与了该过程，包括 CTR、IL-1 以及 IL-6[14-16]。CTR 是降钙素的特异性结合位点，广泛分布于破骨细胞中[17]，同时也是破骨细胞的特征性标志之一。柴建胜等[18]观察去势骨质疏松大鼠肝、脑、肾、小肠及股骨中 CTR 的表达，发现 CTR 在肝、脑、肾中呈低表达，而在小肠及股骨中呈高表达。有学者认为，降钙素与降钙素受体特异性结合后，通过抑制 RANKL（破骨活化因子）的表达而抑制骨重吸收[19-20]。IL-1 是由巨噬细胞产生的一种具有较高活性的小分子蛋白，主要参与机体炎性反应过程。Brandström 等[21]研究表明，IL-1 通过促进破骨细胞前体的分化与成熟而加快骨吸收，进而增强破骨细胞的活性，并抑制破骨细胞的凋亡。有研究证实，雌激素分泌减少后，表达 IL-1 的细胞增多，IL-1 含量增加[22]，骨髓单核细胞向破骨细胞的转化加快，破骨细胞数目增多，骨吸收活性增强。不仅如此，IL-1 还可刺激多种结缔组织产生胶原酶，降解骨基质中的胶原[23]，引起骨量丢失。IL-6 与 IL-1 相似，也是骨代谢过程中重要的细胞因子，二者之间的关系非常密切。Manolagas 等[24]研究认为 IL-1 能够以 IL-6 为中介作用于破骨细胞，促进骨吸收；而 IL-6 被认为在骨质疏松的发病过程中发挥重要作用，它能刺激破骨细胞前体增殖与分化，促进破骨细胞形成，增强骨吸收。因此，我们对骨质疏松模型中 CTR、IL-1 两种因子表达进行了进一步研究。结果显示，C、D、E 组中 CTR、IL-1 表达水显著降低，而 C 组与 A 组比较差异无统计学意义，故狭鳕鱼皮胶原多肽能够降低 CTR、IL-1 的表达水平，其作用机制可能是通过抑制破骨细胞活性，起到保护骨组织的作用，但未发现狭鳕鱼皮胶原多肽对正常大鼠有预防骨质疏松的作用。虽然本研究中各狭鳕鱼皮胶原多肽组 CTR 及 IL-1 表达水平均不同程度降低，但仅代表给予胶原多肽 6 周时情况，随着治疗时间的延长这两种指标是否进一步变化，将是后续研究问题之一。
骨质疏松症是一种全身性骨骼疾病，其特征是骨量丢失、骨微结构改变、骨组织脆性增加，导致骨折发生风险增加[1-2]。据近期统计，全世界大约有 20 亿骨质疏松患者，仅在美国就有约 2 400 万人，其每年约有 150 万名患者发生骨折[3]；因此，骨质疏松症也成为了当今社会不容忽视的健康问题之一。目前雌激素替代疗法是预防和治疗骨质疏松症的首选方案[4]，但长期服用雌激素毒副作用较大。因而，研究毒副作用小、效果显著的治疗方法具有重要临床意义。研究发现，胶原蛋白肽对骨质疏松症有一定治疗作用，包括：① 刺激成骨细胞合成，降低破骨细胞活性，增强骨形成，改善骨微结构；② 维持骨组织密度；③ 扩大骨皮质面积，增强骨骼强度；④ 降低骨吸收程度[5]。目前研究的胶原蛋白肽主要从阿胶中提取，阿胶是从驴皮中提取出的一种胶原蛋白[6-7]，能够促进成骨细胞增殖与分化[8]，增加骨中钙、磷含量及骨质密度。狭鳕鱼皮胶原多肽同样属于小分子多肽，是狭鳕鱼皮经酶解提纯后获得的胶原蛋白肽，其是否具有抗骨质疏松作用尚未见确切报道。为此，我们采用去势大鼠骨质疏松模型，通过观察大鼠骨组织形态学、骨形态计量学参数以及降钙素受体（caltitonin receptor，CTR）、IL-1 的变化，探究狭鳕鱼皮胶原多肽对绝经后骨质疏松症的治疗作用。报告如下。
1 材料与方法
1.1 实验动物及主要试剂、仪器
SPF 级成年 Wistar 雌性大鼠 60 只，体质量（250±10）g，由青岛派特福德白鼠养殖专业合作社提供。狭鳕鱼皮胶原多肽（青岛福生食品有限公司）。4% 多聚甲醛（天津光复精细化研究所）；水合氯醛（天津瑞金特化学品有限公司）；EDTA-2Na（北京索莱宝生物科技有限公司）；CTR 测定试剂盒、IL-1 测定试剂盒（武汉博士德生物工程有限公司）。
RM2016 切片机（上海徕卡仪器有限公司）；电子天平（上海奥豪斯公司）；DNP-9162 电热恒温培养箱（上海三发科学仪器有限公司）；光学显微镜（Olympus 公司，日本）；Image-Pro Plus 6.0 软件（Media Cybernetics 公司，美国）。
1.2 实验分组及方法
将 60 只 Wistar 雌性大鼠随机分为 5 组，每组 12 只，分别为正常对照组（A 组）、骨质疏松模型组（B 组）、骨质疏松模型+狭鳕鱼皮胶原多肽预防组（C 组）、骨质疏松模型+狭鳕鱼皮胶原多肽低剂量治疗组（D 组）、骨质疏松模型+狭鳕鱼皮胶原多肽高剂量治疗组（E 组）。A 组大鼠不制备模型。B、C、D、E 组采用摘除双侧卵巢法建立去势大鼠骨质疏松模型。腹腔注射 3% 水合氯醛麻醉后，无菌条件下切除大鼠双侧卵巢，局部涂撒青霉素粉，预防感染，关闭切口。术后 7 d 每天腹腔注青霉素 0.2～0.3 mL。
C 组从术前 4 周开始，每天按照 1.0 g/kg 行狭鳕鱼皮胶原多肽灌胃，直至术后 6 周。D、E 组从术后 6 周开始每天分别按照 0.5 g/kg 和 1.0 g/kg 行狭鳕鱼皮胶原多肽灌胃，连续 6 周。A、B 组于术后同时间点给予等体积生理盐水灌胃。末次给药后 24 h，取各组大鼠同上法麻醉后进行观测。
1.3 观测指标
1.3.1 一般情况 观察各组大鼠存活情况以及术后大鼠毛发、精神、活动、反应及饮食情况。
1.3.2 大鼠股骨灰度值测定 取 A、B 组大鼠以仰卧位固定，摄股骨 X 线片，采用 Image-Pro Plus 6.0 软件测定其灰度值。
1.3.3 组织学观察 取各组大鼠左侧胫骨近端 1/3 骨组织，置于 4% 多聚甲醛固定 48 h，10%EDTA-2Na 微波脱钙，石蜡包埋，切片，片厚 5 μm。取部分切片常规 HE 染色，光镜下观察骨小梁吸收陷窝变化。于 100 倍镜下，以生长板下 1～4 mm 近皮质处为测量范围，每张切片随机选取 3 个视野，采用 Image-Pro Plus 6.0 软件测算骨组织形态计量学参数[9]，包括骨小梁数量（trabecular number，TN）、平均骨小梁厚度（mean trabecular plate thickness，MTPT）、平均骨小梁间距（mean trabecular plate spacing，MTPS）、骨小梁体积百分比（trabecular bone volume，TBV）、平均骨皮质厚度（mean bone cortical thickness，MBCT），取均值。
1.3.4 免疫组织化学染色 取各组剩余切片脱蜡至水，0.1% 胰蛋白酶抗原修复 25 min，PBS 漂洗 3 次（5 min/次），3%H2O2 消化 10 min，过氧化酶室温孵育 10 min，PBS 漂洗 3 次（5 min/次），将一抗（兔抗大鼠 CTR 多克隆抗体和兔抗大鼠 IL-1 多克隆抗体），按 1∶200 比例配制后加入抗体稀释液中，滴加至切片，37℃ 孵育 1 h，4℃ 过夜；PBS 漂洗 3 次（5 min/次），加入山羊抗兔 IgG 二抗，37℃ 孵育 1 h，PBS 漂洗 3 次（5 min/次），DAB 染色，自来水冲洗，苏木素复染，自来水冲洗 4 次，脱水、二甲苯透明、封片。光镜下观察，细胞质呈棕黄色颗粒者为阳性细胞。于 400 倍镜下，取不重叠的 4 个视野，采用 Image-Pro Plus 6.0 软件计算阳性细胞积分吸光度（IA）值，取均值。
1.4 统计学方法
采用 SPSS22.0 统计软件进行分析。数据以均数±标准差表示，两组间比较采用独立样本t 检验；多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用 LSD 检验；检验水准 α=0.05。
2 结果
2.1 一般情况
术中 5 只大鼠死亡，其中 B 组 2 只、C 组 2 只、E 组 1 只；术后感染死亡 2 只，A、B 组各 1 只；因灌胃误入气管死亡 5 只，其中 C 组 1 只、D 组 2 只、E 组 2 只；其余大鼠均存活至实验完成。术后 B 组大鼠毛发稀疏，精神萎靡，行动缓慢，反应迟钝，饮食变差；A、C、D、E 组大鼠毛发均光亮顺滑，精神、活动、反应均正常、饮食良好。
2.2 大鼠股骨灰度值测定
A、B 组大鼠股骨灰度值分别为 110.12±2.01、65.36±2.43，比较差异有统计学意义（t=45.130，P=0.000），表明去势大鼠骨质疏松模型制备成功。
2.3 组织学观察
镜下观察见，B 组骨小梁吸收陷窝较其余组明显增多、增大。E 组较 D 组骨小梁吸收陷窝数目减少、骨小梁吸收陷窝减小；与 C 组相比无明显差异。见图 1。骨组织形态计量学参数比较：A、C、E 组 TN、MTPS、TBV、MBCT 与 B 组比较，差异有统计学意义（P<0.05）；MTPT 与 B 组比较差异无统计学意义（P>0.05）。D 组仅 MTPS 和 TBV 与 B 组比较差异有统计学意义（P<0.05）。C 组各骨组织形态计量学参数与 D、E 组比较，差异均有统计学意义（P<0.05）；C 组与 A 组比较，除 TN 外，其余各指标比较差异均有统计学意义（P<0.05）。 D、E 组与 A 组比较，仅 D 组 TN、MBCT、MTPS、TBV 及 E 组 MTPS 差异有统计学意义（P<0.05），其余指标比较差异均无统计学意义（P>0.05）。D、E 组间仅 MTPS、TBV、MBCT 比较差异有统计学意义（P<0.05），TN、MTPT 比较差异无统计学意义（P>0.05）。见表 1。
图1
各组组织学观察（HE×400）
箭头示骨小梁吸收陷窝 a. A 组；b. B 组；c. C 组；d. D 组；e. E 组
Figure1. Histological observation of each group (HE×400)Arrow indicated trabecular bone a. Group A; b. Group B; c. Group C; d. Group D; e. Group E
表1
各组大鼠骨组织形态计量学参数比较（
）
Table1.
Comparison of histological parameters of bone tissue between groups (
)
2.4 免疫组织化学染色观察
A、C、D、E 组 CTR、IL-1 表达水平较 B 组降低，C、E 组低于 D 组，差异有统计学意义（P<0.05）；其余组间比较差异均无统计学意义（P>0.05）。见图 2、3 及表 2。
表2
各组 CTR 及 IL-1 表达水平比较（
）
Table2.
Comparisonof the expression levels of CTR and IL-1 bet-ween groups (
)
图2
各组 CTR 免疫组织化学染色观察（DAB×400）
箭头示阳性细胞 a. A 组；b. B 组；c. C 组；d. D 组；e. E 组
Figure2. Immunohistochemical staining of CTR in each group (DAB×400)Arrow indicated positive cells a. Group A; b. Group B; c. Group C; d. Group D; e. Group E
图3
各组 IL-1 免疫组织化学染色观察（DAB×400）
箭头示阳性细胞 a. A 组；b. B 组；c. C 组；d. D 组；e. E 组
Figure3. Immunohistochemical staining of IL-1 in each group (DAB×400)Arrow indicated positive cells a. Group A; b. Group B; c. Group C; d. Group D; e. Group E
3 讨论
狭鳕鱼皮胶原多肽是狭鳕鱼皮经酶解法获得的小分子量多肽，符合国家对水产胶原蛋白粉的要求[10]，研究表明其具有抗氧化、保护成骨细胞[11]、促进钙吸收的作用[12]。另外，有报道指出狭鳕鱼皮胶原蛋白多肽还可用于矿物质缺乏症、高血压、糖尿病等慢性病的治疗[13]。骨组织形态计量学作为一项重要的参考指标，可对骨显微结构进行精确定量分析，尤其是对骨小梁网状系统、骨基质结构、骨表面、骨间质和骨转换进行精确描述，有助于揭示骨组织生理与病理的改变。结果表明，与 B 组比较，C、E 组 TN、TBV、MBCT 均明显升高，MTPS 明显减小，且 C 组优于 E 组。由此可见，狭鳕鱼皮胶原多肽能够增加骨组织中骨小梁数量，增强骨韧性，防止骨基质丢失，减轻骨组织损伤。
骨骼构建是骨形成和骨吸收作用过程，而这一过程主要与成骨细胞和破骨细胞的相互作用有关。当骨吸收强于骨形成时，引起骨量丢失，严重时则引发骨质疏松。目前已证实有多种因子参与了该过程，包括 CTR、IL-1 以及 IL-6[14-16]。CTR 是降钙素的特异性结合位点，广泛分布于破骨细胞中[17]，同时也是破骨细胞的特征性标志之一。柴建胜等[18]观察去势骨质疏松大鼠肝、脑、肾、小肠及股骨中 CTR 的表达，发现 CTR 在肝、脑、肾中呈低表达，而在小肠及股骨中呈高表达。有学者认为，降钙素与降钙素受体特异性结合后，通过抑制 RANKL（破骨活化因子）的表达而抑制骨重吸收[19-20]。IL-1 是由巨噬细胞产生的一种具有较高活性的小分子蛋白，主要参与机体炎性反应过程。Brandström 等[21]研究表明，IL-1 通过促进破骨细胞前体的分化与成熟而加快骨吸收，进而增强破骨细胞的活性，并抑制破骨细胞的凋亡。有研究证实，雌激素分泌减少后，表达 IL-1 的细胞增多，IL-1 含量增加[22]，骨髓单核细胞向破骨细胞的转化加快，破骨细胞数目增多，骨吸收活性增强。不仅如此，IL-1 还可刺激多种结缔组织产生胶原酶，降解骨基质中的胶原[23]，引起骨量丢失。IL-6 与 IL-1 相似，也是骨代谢过程中重要的细胞因子，二者之间的关系非常密切。Manolagas 等[24]研究认为 IL-1 能够以 IL-6 为中介作用于破骨细胞，促进骨吸收；而 IL-6 被认为在骨质疏松的发病过程中发挥重要作用，它能刺激破骨细胞前体增殖与分化，促进破骨细胞形成，增强骨吸收。因此，我们对骨质疏松模型中 CTR、IL-1 两种因子表达进行了进一步研究。结果显示，C、D、E 组中 CTR、IL-1 表达水显著降低，而 C 组与 A 组比较差异无统计学意义，故狭鳕鱼皮胶原多肽能够降低 CTR、IL-1 的表达水平，其作用机制可能是通过抑制破骨细胞活性，起到保护骨组织的作用，但未发现狭鳕鱼皮胶原多肽对正常大鼠有预防骨质疏松的作用。虽然本研究中各狭鳕鱼皮胶原多肽组 CTR 及 IL-1 表达水平均不同程度降低，但仅代表给予胶原多肽 6 周时情况，随着治疗时间的延长这两种指标是否进一步变化，将是后续研究问题之一。
