• 1.成都軍區(qū)總醫(yī)院全軍普通外科中心(成都 610083);;
  • 2.南方醫(yī)科大學(xué)病生教研室(廣州 510515);

目的  構(gòu)建人flag-AWP1（associated with protein kinase C related kinase 1）基因的重組腺病毒載體作為AWP1的轉(zhuǎn)基因工具，研究AWP1在人血管內(nèi)皮細(xì)胞ECV304中的表達(dá)與定位。方法  將flag-AWP1基因亞克隆到腺病毒穿梭載體pAdTrack-CMV，經(jīng)酶切鑒定正確后PmeⅠ線性化,轉(zhuǎn)化至帶有骨架質(zhì)粒pAdEasy-1的大腸桿菌BJ5183中進(jìn)行重組； 經(jīng)PacⅠ酶切鑒定和 PCR鑒定、線性化后，用Lipofectamine轉(zhuǎn)染293細(xì)胞進(jìn)行包裝、反復(fù)感染以獲取高滴度重組病毒上清。再用獲得的重組腺病毒Ad-flag-AWP1感染ECV304細(xì)胞，激光掃描共焦顯微鏡下觀察AWP1在ECV304細(xì)胞中的表達(dá)與定位。結(jié)果  包裝病毒顆粒的PCR分析顯示，成功獲得了重組腺病毒Ad-flag-AWP1，該重組腺病毒能夠高效感染ECV304細(xì)胞，并在激光掃描共焦顯微鏡下觀察到AWP1在細(xì)胞內(nèi)成功表達(dá)，且定位于細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)。結(jié)論  成功構(gòu)建了flag-AWP1的重組腺病毒基因轉(zhuǎn)染載體，AWP1在ECV304細(xì)胞中的表達(dá)與定位提示AWP1可能具有細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)因子的潛能，尚需進(jìn)一步研究。

引用本文： 曹永寬,莫永炎,劉志峰,薛剛,王培紅,姜勇,田伏洲. 人AWP1重組腺病毒的構(gòu)建及其在人血管內(nèi)皮細(xì)胞中的表達(dá)和定位. 中國(guó)普外基礎(chǔ)與臨床雜志, 2009, 16(12): 987-990. doi: 復(fù)制

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