目的 構(gòu)建可經(jīng)米非司酮（RU486）調(diào)控表達(dá)小鼠白細(xì)胞介素-12(mIL-12)單鏈融合基因的真核載體, 并鑒定其調(diào)控表達(dá)效果。方法 以GCp35Ep40PN質(zhì)粒為模板，分別獲取mIL-12 p40和p35亞基的基因, 重疊PCR引入linker后,克隆入pCA14質(zhì)粒,測序正確之后，裝入可調(diào)控載體pRS-17而構(gòu)建成真核表達(dá)質(zhì)粒pRS-RUmIL-12。用Lipofectamine 2000將pRS-RUmIL-12質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞，以不同劑量的RU486誘導(dǎo)其表達(dá)，然后用ELISA法檢測其培養(yǎng)上清液中mIL-12蛋白的含量。結(jié)果 所得mIL-12單鏈融合基因序列與設(shè)計一致。pRS-RUmIL-12在體外轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞后，ELISA檢測結(jié)果表明該系統(tǒng)具有良好的調(diào)控能力: 無誘導(dǎo)劑RU486時，mIL-12蛋白表達(dá)量很低，而加入誘導(dǎo)劑RU486后，可以誘導(dǎo)mIL-12的表達(dá)，并在一定范圍內(nèi)mIL-12的蛋白表達(dá)量與誘導(dǎo)劑的濃度呈正相關(guān)。結(jié)論 成功構(gòu)建了可經(jīng)RU486調(diào)控的mIL-12雙亞基共表達(dá)的真核表達(dá)質(zhì)粒,可用于進(jìn)一步的基因調(diào)控和基因治療研究。
引用本文： 陳堅,張斌,薛緒潮,方國恩,蘇長青,錢其軍. 可調(diào)控的鼠白細(xì)胞介素-12雙亞基共表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及在體外表達(dá). 中國普外基礎(chǔ)與臨床雜志, 2008, 15(12): 892-897. doi: 復(fù)制