目的 構建人白細胞介素(human interleukin, hIL)-10和綠色熒光蛋白(green fluorescent protein, GFP)雙表達腺病毒載體，觀察目的基因在血管平滑肌細胞(vascular smooth muscle cells, VSMCs)的表達。
方法 以T載體(pUCm-T/hIL-10 cDNA)為模板，PCR擴增hIL-10 cDNA，連入穿梭質粒，〖JP2〗卡那霉素抗性篩選，Not Ⅰ、Xhol Ⅰ酶切鑒定，測序，局部序列搜索工具(BLAST)分析序列正確，Pme Ⅰ 酶切，電穿孔單獨轉化BJ5183-AD-1，轉化XL10-Gold擴增，PacⅠ酶切，AD-293細胞包裝，PCR鑒定，測定病毒滴度，脂質體介導轉染VSMCs，熒光顯微鏡下觀察GFP的表達，酶聯免疫吸附試驗(ELISA)檢測培養(yǎng)上清液中hIL-10的含量。
結果 重組穿梭質粒構建正確，同源重組后PacⅠ酶切獲得30 kb和3 kb片段，重組病毒滴度為3×1010 efu/ml，PCR檢測含目的基因，轉染的VSMCs可見綠色熒光，hIL-10含量為25 ng/106個細胞。
結論 構建的雙表達載體于VSMCs成功表達，為血管內膜增生的基因治療打下基礎。
引用本文： 汪圣毅,王玉琦,符偉國,劉康達,劉弋. 白細胞介素-10腺病毒載體制備及其在血管平滑肌細胞的表達. 中國普外基礎與臨床雜志, 2007, 14(6): 660-664. doi: 復制
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