目的  提取SD 大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞( PASMCs) 并原代培養(yǎng), 為研究肺血管疾病提供體外模型, 研究缺氧對(duì)大鼠PASMCs 增殖的影響。
方法  組織貼壁法分離大鼠PASMCs, 光鏡觀察細(xì)胞形態(tài)、透射電鏡、α肌動(dòng)蛋白( α-SM-actin) 細(xì)胞免疫化學(xué)和細(xì)胞免疫熒光法進(jìn)行鑒定。原代培養(yǎng)的PASMCs 分別于常氧和/ 或低氧下培養(yǎng)2、6、12、24 及48 h, 用四甲基偶氮唑鹽( MTT) 比色法和增殖細(xì)胞核抗原( PCNA) 細(xì)胞免疫化學(xué)法檢測細(xì)胞增殖情況。
結(jié)果  光鏡下PASMCs 細(xì)胞為長梭形, 呈典型的“峰-谷”狀結(jié)構(gòu)。免疫學(xué)檢測顯示胞漿被染成棕黃色, 陽性率達(dá)96% 以上。透射電鏡下細(xì)胞呈長梭形, 胞漿內(nèi)有密斑、密體和大量肌絲, 細(xì)胞器較少。MTT檢測結(jié)果示各時(shí)間點(diǎn)缺氧組PASMCs 吸光度( A值) 均高于相對(duì)應(yīng)的常氧組; 與常氧組比較, 低氧組A 值在12 h 時(shí)開始增加( P  lt;0. 05) , 24 h時(shí)增加最顯著( P  lt;0. 01) 。與缺氧2 h 組比較, A 值在缺氧12 h開始增高( P  lt;0. 05) , 缺氧24 h 增高最顯著( P  lt;0. 01) , 而缺氧48 h 與缺氧24 h 基本一致。PCNA 免疫學(xué)結(jié)果與MTT 結(jié)果基本一致。
結(jié)論  用組織塊貼壁法提取PASMCs, 簡單易行, 且能得到純度高、穩(wěn)定生長的PASMCs。缺氧可以促進(jìn)PASMCs 的增殖。

引用本文： 王靜,戴愛國. 原代大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的提取和鑒定以及缺氧對(duì)其增殖的影響. 中國呼吸與危重監(jiān)護(hù)雜志, 2012, 11(2): 147-152. doi: 復(fù)制