摘要： 目的 體外培養(yǎng)、誘導(dǎo)主動脈瓣膜間質(zhì)細胞鈣化，并觀察其表型變化。 方法 使用膠原酶消化法從新鮮豬主動脈瓣膜上分離并體外原代培養(yǎng)主動脈瓣膜間質(zhì)細胞，行免疫熒光染色細胞鑒定。取4~8代間質(zhì)細胞，隨機分為兩組，實驗組：以含甘油磷酸、維生素C、地塞米松的鈣化培養(yǎng)基進行鈣化誘導(dǎo)培養(yǎng)2周；對照組：以標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基培養(yǎng)2周。在光學(xué)顯微鏡下行鈣化結(jié)節(jié)計數(shù)，茜素紅染色觀察并半定量檢測鈣沉積含量；采用實時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測間質(zhì)細胞α-平滑肌肌動蛋白（α-SMA）及鈣化相關(guān)因子（骨鈣素、 骨橋蛋白、核心結(jié)合因子）的基因表達。 結(jié)果 從豬主動脈瓣膜上成功分離并體外培養(yǎng)瓣膜間質(zhì)細胞，α-SMA及波形蛋白（vimentin）染色陽性，血管性血友病因子（vWF）染色陰性。間質(zhì)細胞鈣化誘導(dǎo)培育2周可成功誘導(dǎo)鈣化，自發(fā)形成鈣化結(jié)節(jié)，實驗組鈣化結(jié)節(jié)(156.25±17.38個/孔vs. 2.50±1.29個/孔)和鈣沉積 (17.52±2.04 vs. 1.00±0.22) 顯著高于對照組（P lt;0.05）; 實時RT-PCR提示：實驗組αSMA、骨鈣素、骨橋蛋白、核心結(jié)合因子等表達均較對照組明顯升高（P lt;0.05）。 結(jié)論 體外誘導(dǎo)鈣化的瓣膜間質(zhì)細胞呈現(xiàn)相對激活狀態(tài)，表型向收縮表型和成骨表型轉(zhuǎn)化，可能為瓣膜鈣化的病理基礎(chǔ)。
引用本文： 陳思,董念國,史嘉瑋. 主動脈瓣膜間質(zhì)細胞體外誘導(dǎo)鈣化的實驗研究. 中國胸心血管外科臨床雜志, 2010, 17(5): 385-389. doi: 復(fù)制
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