目的 為早期診斷和有效預防心臟移植排斥反應，研究在細胞水平用心肌NAD(P)H熒光成分分析監(jiān)測排斥反應的可行性。 方法 用NAD(P)H熒光標記監(jiān)測線粒體功能，從14例兒童心臟移植患者心內膜活檢組織中分離活體心肌細胞和大鼠(n=5, 13~14周齡)心肌細胞，光譜分辨的時間相關單光子計數(TCSPC)記錄375 nm紫外激光激發(fā)的心肌自發(fā)熒光(AF)光譜和熒光壽命。將鼠心肌細胞分為4組，無缺氧對照組，無缺氧魚藤酮組，缺血對照組和缺血魚藤酮組； 對比無排斥反應（R0）人心肌細胞，無缺氧鼠細胞和缺血鼠細胞間， R0人心肌細胞和輕度排斥反應（R1）間的AF動力學變化。 結果 成功分離并測定了人心肌細胞AF光譜，在420~560 nm光譜區(qū)域，至少存在0.5~0.7 ns，1.9~2.4 ns和9.0~15.0 ns 3個AF壽命池。與無缺氧對照組比較，缺血對照組鼠心肌細胞熒光強度明顯增強（P lt;0.05）；無缺氧魚藤酮組和缺血魚藤酮組心肌AF強度均顯著增強，兩組比較差異無統(tǒng)計學意義（P gt;0.05）。R0組人心肌細胞AF強度顯著弱于無缺氧對照組鼠心肌細胞(P lt;0.05)；人心肌AF強度與排斥反應相關， R1的熒光強度顯著增強(P lt;0.05)，但光譜形態(tài)無改變，與缺血對照組鼠心肌細胞光譜改變一致。 結論 光譜分辨的熒光光譜結合熒光壽命分析是監(jiān)測心肌線粒體氧化代謝的敏感方法，有良好的重復性。人心肌AF表現出較高的代謝活性，排斥反應時活性降低。該技術結合多光子共聚焦顯微鏡，可直接在體評估線粒體功能，是監(jiān)測早期排斥反應的新方法。
引用本文： 程穎,任明明,Poirier,N等. 心肌細胞NAD(P)H熒光成分分析法監(jiān)測心臟移植排斥反應. 中國胸心血管外科臨床雜志, 2009, 16(6): 459-465. doi: 復制