摘要： 目的 探討并改進(jìn)從人骨髓中分離、誘導(dǎo)培養(yǎng)和體外擴(kuò)增內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPCs)的方法，為EPCs參與基礎(chǔ)研究和臨床應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。 方法 采用不同的細(xì)胞分離液，用密度梯度離心法從正常人骨髓中分離單個(gè)核細(xì)胞(hBMMNCs)，分別培養(yǎng)在包被人纖維連接蛋白(HFN包被組)，包被明膠(明膠包被組)和未包被(未包被組)的培養(yǎng)皿內(nèi)，利用EBM-2培養(yǎng)4～7d后出現(xiàn)細(xì)胞克隆集落(cell colony-forming units,CFUs)，挑選內(nèi)皮祖細(xì)胞樣CFUs繼續(xù)培養(yǎng)(CFUs挑選法)，采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD34+ KDR+和CD133+ KDR+雙熒光陽(yáng)性細(xì)胞，細(xì)胞免疫化學(xué)法檢測(cè)EPCs表面標(biāo)記CD133、CD34、CD31、vWF和KDR的表達(dá)。 結(jié)果 用OptiprepTM分離液可從人骨髓中更有效地分離出hBMMNCs，進(jìn)而誘導(dǎo)獲取更多EPCs并可進(jìn)行體外培養(yǎng)擴(kuò)增；流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示CD133+ KDR+細(xì)胞高達(dá)70.4%±5.4%， CD34+KDR+細(xì)胞高達(dá)69.1%±8.7%；HFN包被組和明膠包被組細(xì)胞生長(zhǎng)一樣旺盛，均可促進(jìn)EPCs的貼壁生長(zhǎng)，促進(jìn)其生長(zhǎng)的作用差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P gt;0.05)，而未包被組細(xì)胞生長(zhǎng)數(shù)量最少。培養(yǎng)7d的貼壁細(xì)胞表面標(biāo)記CD133、CD31、vWF和KDR均呈陽(yáng)性，培養(yǎng)14d 的貼壁細(xì)胞表面標(biāo)記CD34呈陽(yáng)性。 結(jié)論 CFUs挑選法可以從人骨髓中成功地獲取更多EPCs并在體外擴(kuò)增，提出了另一種獲取EPCs的高效簡(jiǎn)單方法，進(jìn)一步拓寬了獲取EPCs的方法和范圍。
引用本文： 柳瑞軍,鐘竑,單根法,許勤,熊健. 人骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞的分離、誘導(dǎo)培養(yǎng)和擴(kuò)增. 中國(guó)胸心血管外科臨床雜志, 2008, 15(2): 113-117. doi: 復(fù)制