• 蘭州軍區(qū)蘭州總醫(yī)院（蘭州，730050） 1 骨科研究所，2 神經(jīng)外科;

【摘 要】 目的 探討傳統(tǒng)中藥紅景天苷誘導(dǎo)大鼠BMSCs 向膽堿能神經(jīng)細(xì)胞分化的作用及影響，以期為紅景
天苷應(yīng)用于干細(xì)胞治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病提供理論依據(jù)。 方法 取4 ～ 6 周齡Wistar 大鼠（體重約120 g）2 只分離、培養(yǎng)
BMSCs，并采用流式細(xì)胞儀鑒定。取第2 代細(xì)胞，根據(jù)誘導(dǎo)方法不同將實(shí)驗(yàn)分為紅景天苷誘導(dǎo)組（A 組）、維甲酸誘導(dǎo)組
（B 組）和空白對照組（C 組），A、B 組BMSCs 分別采用紅景天苷（20 μg/mL）和維甲酸（5 μmol/mL）誘導(dǎo)培養(yǎng)1、3、6、9 d，MTT 法檢測細(xì)胞增殖活力；細(xì)胞免疫熒光染色檢測神經(jīng)細(xì)胞相關(guān)標(biāo)志分子神經(jīng)元特異性烯醇化酶（neuron-specific
enolase，NSE）、神經(jīng)微管相關(guān)蛋白2（microtubule-associated protein 2，MAP2）、β- 微管蛋白Ⅲ（β-Tubulin Ⅲ）、神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein，GFAP）、乙酰膽堿（Acetylcholine, Ach）及NGF 的表達(dá)；RT-PCR 檢測NSE、β-Tubulin Ⅲ、GFAP、γ- 氨基丁酸（γ-aminobutyric acid，GABA）、 腦源性神經(jīng)生長因子（brain derived neurotrophic factor，BDNF） mRNA 的表達(dá)；ELISA 法測定培養(yǎng)液中BDNF 和NGF 含量；Western blot 檢測NGF 蛋白表達(dá)水平。 結(jié)果 流式細(xì)胞儀檢測顯示，CD90 和CD106 陽性，CD34 和CD45 陰性，實(shí)驗(yàn)細(xì)胞為BMSCs。A、B 組誘導(dǎo)培養(yǎng)6 d 和9 d，細(xì)胞增殖活力較C 組明顯增強(qiáng)（P  lt; 0.05）。RT-PCR 檢測示，A 組誘導(dǎo)培養(yǎng)6 d，NSE、BDNF、β-Tubulin Ⅲ、GFAP mRNA 表達(dá)豐度上調(diào)至峰值。B 組誘導(dǎo)培養(yǎng)6 d，NSE mRNA 表達(dá)豐度上調(diào)至峰值；1 d 時(shí)BDNF mRNA 表達(dá)豐度上調(diào)，6 d 時(shí)達(dá)峰值；3 d 時(shí)β-Tubulin Ⅲ mRNA 表達(dá)豐度上調(diào)至峰值；1 d 時(shí) GFAP mRNA 表達(dá)豐度達(dá)峰值，與其余各時(shí)間點(diǎn)及C 組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P  lt; 0.01）。各組各時(shí)間點(diǎn)均未見GABA mRNA 表達(dá)。細(xì)胞免疫熒光染色示，誘導(dǎo)培養(yǎng)3 d，A、B 組NSE、MAP2、β-Tubulin Ⅲ和GFAP 陽性率與C 組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P  lt; 0.01）；A、B 組誘導(dǎo)培養(yǎng) 3、6、9 d，Ach 陽性率均高于誘導(dǎo)培養(yǎng)1 d 時(shí)及C 組陽性率（P  lt; 0.01）；A、B 組各時(shí)間點(diǎn)NGF 陽性率均顯著高于C 組（P  lt; 0.01）。ELISA 法檢測顯示，A、B 組誘導(dǎo)培養(yǎng) 1、3、6、9 d 時(shí)，BDNF、NGF 表達(dá)水平均較C 組上調(diào)（P  lt; 0.01），各時(shí)間點(diǎn)A、B 組間BDNF 表達(dá)水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P  lt; 0.01）。Western blot 檢測顯示，A 組誘導(dǎo)培養(yǎng)6 d、B 組誘導(dǎo)培養(yǎng)3 d 時(shí) NGF 蛋白表達(dá)最高。 結(jié)論 紅景天苷能定向誘導(dǎo)大鼠BMSCs 分化為膽堿能神經(jīng)細(xì)胞。

引用本文： 張明,趙紅斌,荔志云,楊銀書,文益民,董菊子,張全偉,葛寶豐. 紅景天苷對大鼠BMSCs 向膽堿能神經(jīng)細(xì)胞分化的影響. 中國修復(fù)重建外科雜志, 2012, 26(2): 158-165. doi: 復(fù)制

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