目的 探索轉(zhuǎn)染hVEGF165 基因、人基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1α（human stromal cell-derived factor 1α，hSDF- 1α）基因的大鼠成肌細(xì)胞在體外mRNA 和蛋白表達(dá)，為進(jìn)一步檢測(cè)這兩種基因?qū)ρ苌傻膮f(xié)同效應(yīng)奠定基礎(chǔ)。 方法 取新生1 日齡雄性SD 大鼠，采用胰蛋白酶消化法體外分離培養(yǎng)、純化成肌細(xì)胞，并采用結(jié)蛋白免疫細(xì)胞化學(xué)染色鑒定。將質(zhì)粒增強(qiáng)型綠色熒光蛋白（enhanced green fluorescent protein，EGFP）-hVEGF165 和EGFP-hSDF-1α 轉(zhuǎn)染第3 代成肌細(xì)胞（轉(zhuǎn)染組），以未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的細(xì)胞作為對(duì)照組。體外培養(yǎng)后各時(shí)間點(diǎn)行RT-PCR、Western blot、ELISA 法檢測(cè)兩種質(zhì)粒mRNA 及蛋白的表達(dá)。 結(jié)果 培養(yǎng)的細(xì)胞經(jīng)鑒定確定為成肌細(xì)胞。熒光顯微鏡觀察示成功轉(zhuǎn)染hSDF- 1α和hVEGF165 進(jìn)入成肌細(xì)胞，可見綠色熒光表達(dá)。RT-PCR 檢測(cè)示轉(zhuǎn)染組轉(zhuǎn)染后2、4、6、8 d 均可見hVEGF165 和hSDF- 1αmRNA 的表達(dá)，Western blot 檢測(cè)示轉(zhuǎn)染組轉(zhuǎn)染后2、4、6、8 d 成肌細(xì)胞內(nèi)均有hVEGF165 和hSDF-1α 蛋白表達(dá)，對(duì)照組均無相關(guān)表達(dá)。ELISA 檢測(cè)示對(duì)照組hSDF-1α 和hVEGF165 均穩(wěn)定表達(dá)，呈較低水平。轉(zhuǎn)染組轉(zhuǎn)染2 d 時(shí)hSDF-1α 和hVEGF165 表達(dá)均達(dá)較高水平，之后呈逐漸下降趨勢(shì)；轉(zhuǎn)染后各時(shí)間點(diǎn)間hSDF-1α 和hVEGF165 表達(dá)比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。轉(zhuǎn)染組轉(zhuǎn)染后各時(shí)間點(diǎn)與對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。 結(jié)論 轉(zhuǎn)染hSDF-1α 和hVEGF165 進(jìn)入大鼠成肌細(xì)胞后在體外均有表達(dá)，為下一步研究體內(nèi)是否表達(dá)提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
引用本文： 何等旗,唐休發(fā),華成舸. 人基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1α 和hVEGF165 基因轉(zhuǎn)染成肌細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究. 中國(guó)修復(fù)重建外科雜志, 2011, 25(10): 1239-1244. doi: 復(fù)制