目的 地塞米松是MSCs 成骨誘導(dǎo)分化的基礎(chǔ)試劑，探討誘導(dǎo)脂肪干細(xì)胞（adipose-derived stem cells，ADSCs）成骨分化過程中地塞米松的優(yōu)選濃度，為進(jìn)一步骨組織工程研究提供理論依據(jù)。 方法 3 月齡清潔級健康新西蘭大白兔5 只，雌雄不限，體重2 ～ 3 kg。取腹股溝區(qū)皮下脂肪4 ～ 6 mL，采用膠原酶消化離心貼壁法分離培養(yǎng)ADSCs，取第3 代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化；聯(lián)合CD44、CD106 免疫熒光染色和成脂誘導(dǎo)分化鑒定ADSCs。調(diào)整細(xì)胞密度為1 × 105 個(gè)/mL，分別用普通培養(yǎng)液（A 組）及含0（B 組）、1 × 10-9（C 組）、1 × 10-8（D 組）、1 ×10-7（E 組）、1 × 10-6（F 組）、1 × 10-5 mol/L（G 組）地塞米松的成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)液對ADSCs 進(jìn)行培養(yǎng)。MTT 法檢測細(xì)胞增殖情況；RT-PCR 檢測誘導(dǎo)細(xì)胞骨鈣素（osteocalcin，OC）和核心結(jié)合因子α1（core binding factor α1，Cbfα1）的表達(dá)；測定ALP 活性及礦化面積百分率；對礦化結(jié)節(jié)行茜素紅染色。 結(jié)果 ADSCs 形態(tài)多為梭形、多角形，呈“漩渦狀”排列；表面抗原分子CD44 呈陽性，CD106 呈陰性，成脂誘導(dǎo)后可觀察到細(xì)胞內(nèi)有脂滴形成，油紅O 染色呈陽性。MTT 檢測顯示隨地塞米松濃度升高，吸光度（A）值呈下降趨勢；其中成骨誘導(dǎo)5、7 d 時(shí)，D、E 組A 值比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。RT-PCR 檢測示，成骨誘導(dǎo)7 d OC 和Cbfα1 mRNA 的表達(dá)分別在E 組和D 組達(dá)高峰；成骨誘導(dǎo)14 d ALP 活性和礦化面積百分率均在D 組達(dá)高峰，隨后逐漸下降。D、E 組間OC 和Cbfα1 mRNA 的表達(dá)量、ALP 活性及礦化面積百分率比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05），與其余各組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。成骨誘導(dǎo)14 d，G 組細(xì)胞均死亡；茜素紅染色除A、G 組外均呈陽性。 結(jié)論 成骨培養(yǎng)液中地塞米松濃度為1 × 10-8 mol/L 時(shí)，能在減少對細(xì)胞增殖抑制的同時(shí)，更有效地誘導(dǎo)ADSCs 成骨分化。
引用本文： 王偉 ,陳磊杰,張晨,余強(qiáng),王坤正. 不同濃度地塞米松誘導(dǎo)脂肪干細(xì)胞成骨分化的實(shí)驗(yàn)研究. 中國修復(fù)重建外科雜志, 2011, 25(12): 1486-1492. doi: 復(fù)制
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