目的 建立人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVECs）體外高效穩(wěn)定培養(yǎng)的方法，為組織工程及相關(guān)醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究提供穩(wěn)定的細(xì)胞來源。 方法 取自愿捐贈足月妊娠分娩的新生兒臍帶，用自制空針軟管靜脈注入0.1% Ⅱ型膠原酶，置于37℃培養(yǎng)箱中，消化收集，采用含5% FBS 及1% 內(nèi)皮細(xì)胞生長因子（endothelial cell growth factor,ECGS）的內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。將消化前后的臍帶標(biāo)本行HE 染色，觀察HUVECs 脫壁情況；流式細(xì)胞儀檢測原代細(xì)胞純度；細(xì)胞培養(yǎng)期間于倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)；取第3 代HUVECs行免疫細(xì)胞化學(xué)染色觀察、MTT 檢測細(xì)胞增殖情況，并將細(xì)胞接種于細(xì)胞外基質(zhì)膠Matrigel 上培養(yǎng)24 h，觀察細(xì)胞管腔形成情況。 結(jié)果 經(jīng)Ⅱ型膠原酶消化后的臍帶內(nèi)HUVECs 大量脫落，細(xì)胞消化完全。經(jīng)Ⅱ型膠原酶37℃培養(yǎng)箱中消化15 min 后，可獲得純度為 99.56% 的HUVECs；原代HUVECs 培養(yǎng)后2 ～ 3 d 生長最快，呈典型的鋪路石或鵝卵石樣排列，4 ～ 6 d 融合成片。 MTT 法檢測顯示第3 代HUVECs 培養(yǎng)后3 ～ 4 d 細(xì)胞生長最快，5 d 左右融合；免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示內(nèi)皮細(xì)胞Ⅷ因子相關(guān)抗原表達陽性，培養(yǎng)24 h 后在細(xì)胞外基質(zhì)膠Matrigel 上可見類似于毛細(xì)血管的完整閉合管腔形成。 結(jié)論 經(jīng)自制空針軟管靜脈注入0.1%Ⅱ型膠原酶，使靜脈充分充盈，內(nèi)皮消化完全，采用含5%FBS 和1%ECGS的內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基，可迅速獲取大量高純度、高存活率的HUVECs。
引用本文： 蔡維霞,梁亮,計鵬,張萬福,張戰(zhàn)鳳,張彥剛,肖西峰,白曉智,朱華宇,胡大海,韓驊. 人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞體外培養(yǎng)的方法研究. 中國修復(fù)重建外科雜志, 2011, 25(2): 139-143. doi: 復(fù)制