目的 構(gòu)建hBMP-7 基因真核表達載體，觀察其在兔脂肪源性干細胞（adipose-derived stem cells，ADSCs）的表達，并觀察其對ADSCs 向成骨細胞分化的影響。 方法 3 月齡清潔級健康日本大耳白兔，雌雄不限，體重3 ～ 4 kg。取兔皮下脂肪約5 mL，采用膠原酶消化離心貼壁培養(yǎng)法培養(yǎng) ADSCs，取第3 代細胞進行實驗；CD44、CD49d、CD106 免疫熒光染色鑒定ADSCs。構(gòu)建真核表達載體pcDNA3.1-hBMP-7，經(jīng)鑒定后利用LipofectamineTM 2000 介導(dǎo)轉(zhuǎn)染ADSCs，免疫組織化學(xué)染色檢測hBMP-7 在ADSCs 中的表達；ALP 定量測定、Ⅰ型膠原免疫熒光檢測hBMP-7 基因轉(zhuǎn)染對ADSCs 向成骨細胞分化的影響。 結(jié)果 倒置相差顯微鏡觀察示ADSCs 呈梭形、多角形分布；表面抗原標(biāo)志CD44、CD49d 呈陽性表達，CD106 呈陰性表達。成功構(gòu)建pcDNA3.1-hBMP-7 真核表達載體，并利用脂質(zhì)體介導(dǎo)的方法成功導(dǎo)入ADSCs 中，免疫組織化學(xué)染色提示hBMP-7 能在ADSCs 中表達。ALP 定量測定示，轉(zhuǎn)染后7、10、14 d pcDNA3.1-hBMP-7 轉(zhuǎn)染組（實驗組）ALP 活性明顯高于pcDNA3.1 空載體轉(zhuǎn)染組（對照組），差異有統(tǒng)計意義（P lt; 0.05）；轉(zhuǎn)染后7、14 d，實驗組Ⅰ型膠原表達量均高于對照組（P lt; 0.05）。 結(jié)論 構(gòu)建的真核表達載體pcDNA3.1-hBMP-7 可在兔ADSCs中表達，且轉(zhuǎn)染后的ADSCs ALP 定量測定、成骨標(biāo)志物Ⅰ型膠原的表達均高于pcDNA3.1 空載體轉(zhuǎn)染細胞，為開展以干細胞為載體的局部基因治療奠定了基礎(chǔ)。
引用本文： 任逸眾,韓長旭,賈巖波,銀和平,李樹文. hBMP-7 基因在脂肪源性干細胞中的表達及對其向成骨細胞分化的影響. 中國修復(fù)重建外科雜志, 2011, 25(7): 848-853. doi: 復(fù)制