目的 研究殼聚糖 - 藻酸鹽支架復合 BMSCs 構建組織工程脊髓，橋接大鼠脊髓半橫斷損傷斷端，促進急性脊髓損傷（spinal cord injury， SCI）修復的作用。? 方法? 取 1 只成年雄性 SD 大鼠骨髓，分離、培養(yǎng) BMSCs。采用冷凍干燥法制備殼聚糖 - 藻酸鹽支架，掃描電鏡觀察結構，用浸提液實驗檢測毒性。將支架材料與第 2 代 BMSCs 以細胞密度 1 × 106個 /mL 體外復合培養(yǎng)制備組織工程脊髓，于培養(yǎng)后 1、 3、 5 d 掃描電鏡觀察其生物相容性。取成年雌性 SD 大鼠
40 只制備急性脊髓 T9 半橫斷損傷模型，根據(jù)修復方法不同隨機將大鼠分為 4 組（n=10）。A 組于損傷區(qū)植入組織工程脊
髓， B 組植入單純支架， C 組植入 20 μL 1 × 107個 /mL BMSCs， D 組直接縫合硬膜作為空白對照。術后 1、 2、 4、 6 周采用Basso-Beattie-Bresnahan（BBB）評分評價大鼠后肢運動功能；術后 6 周取材行麥芽凝集素 - 辣根過氧化物酶（wheat germ agglutinin-horseradish peroxidase，WGA-HRP）神經(jīng)逆行示蹤檢測、 HE 染色和免疫熒光染色檢測。? 結?果 掃描電鏡觀察示殼聚糖 - 藻酸鹽支架呈三維多孔海綿樣結構。浸提液實驗顯示支架材料的細胞毒性等級為 0 ～ 1 級。掃描電鏡觀察示 BMSCs 與支架材料復合培養(yǎng) 3 d 后即可黏附于支架材料表面，細胞呈一定方向排列。術后 2、 4、 6 周 A 組 BBB 評分均明顯高于其余各組，D 組明顯低于其余各組，差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）； B 組術后 4、6 周高于 C 組（P lt; 0.05）。術后 6 周，各組 WGA-HRP 神經(jīng)逆行示蹤檢測示陽性神經(jīng)纖維均未能穿過脊髓斷端。HE 染色與免疫熒光染色顯示 A 組宿主脊髓與組織工程脊髓連接緊密，損傷區(qū)內(nèi)無明顯瘢痕組織長入，有較多神經(jīng)絲蛋白 200（neuroflament 200，NF-200）陽性細胞發(fā)生的神經(jīng)纖維及神經(jīng)元特異性烯醇化酶（neuron specifc enolase， NSE）陽性神經(jīng)元樣細胞； B 組支架植入外周可見成纖維細胞形成的瘢痕組織以及少量侵入尚未降解的支架材料；交界區(qū)可見少量 NSE、NF-200 陽性細胞； C、D 組脊髓斷端見瘢痕組織填充， D組脊髓損傷周邊有空洞形成，兩組均未見明顯NSE、 NF-200陽性神經(jīng)元樣細胞。? 結?論 殼聚糖-藻酸鹽支架與 BMSCs 復合構建的組織工程脊髓對大鼠急性 SCI 修復有促進作用，是一種具有潛在應用前景的支架材料。
引用本文： 汪大彬,文益民,藍旭,李輝映. 殼聚糖 - 藻酸鹽支架復合 BMSCs 修復急性脊髓損傷的實驗研究. 中國修復重建外科雜志, 2010, 24(2): 190-196. doi: 復制