目的 探討大鼠血清體外擴(kuò)增BMSCs 的可能性，及淤膽大鼠血清和肝細(xì)胞生長因子（hepatocyte growth factor，HGF）體外誘導(dǎo)其分化為肝細(xì)胞，解決肝組織工程細(xì)胞來源短缺的可行性。 方法 取6 周齡健康雌性Wistar 大鼠股骨和脛骨骨髓細(xì)胞，分離、純化并傳代培養(yǎng)BMSCs。取12 ～ 14 周齡健康Wistar 大鼠40 只，隨機(jī)分為兩組（n=20），制備正常及淤膽大鼠血清。取第3 代BMSCs 按培養(yǎng)液不同分組：A 組，DMEM 加10%FBS；B 組，肝細(xì)胞生長培養(yǎng)基（hepatocyte growth medium，HGM）加5%FBS；C 組，HGM 加5% 正常大鼠血清；D 組，HGM 加5% 淤膽大鼠血清；E 組，HGM 加5% 淤膽大鼠血清、25 μg/L HGF。觀察各組誘導(dǎo)培養(yǎng)過程中的細(xì)胞形態(tài)變化，MTT 法測(cè)定細(xì)胞生長曲線，免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)甲胎蛋白（alpha-fetoprotein，AFP）、細(xì)胞角蛋白18（cytokeratin 18，CK18）表達(dá)，高碘酸- 希夫染色檢測(cè)糖原表達(dá)，脲酶- 谷氨酰脫氫酶法檢測(cè)上清液尿素含量。 結(jié)果 誘導(dǎo)培養(yǎng)過程中D、E 組出現(xiàn)多角形及雙核細(xì)胞，A、B、C 組細(xì)胞形態(tài)無明顯變化。MTT 生長曲線顯示C 組細(xì)胞生長速度最快，B 組最慢，與A、D、E 組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05），A、D、E 組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。D、E 組于誘導(dǎo)培養(yǎng)7 d 開始出現(xiàn)AFP 及CK18 陽性表達(dá)，14 d 開始出現(xiàn)糖原陽性表達(dá)，同時(shí)間點(diǎn)E 組陽性表達(dá)率高于D 組（P lt; 0.05）；D、E 組上清液中尿素含量隨誘導(dǎo)時(shí)間延長逐漸升高，同時(shí)間點(diǎn)E 組高于D 組（P lt; 0.05）。各時(shí)間點(diǎn)A、B、C 組均未見AFP、CK18、糖原陽性表達(dá)，尿素濃度無明顯變化。 結(jié)論 正常大鼠血清能明顯促進(jìn)BMSCs 增殖；淤膽大鼠血清對(duì)BMSCs 有一定促增殖作用，且能有效誘導(dǎo)其向肝細(xì)胞分化；聯(lián)合使用淤膽血清和HGF 能提高細(xì)胞分化率。
引用本文： 鐘曉琳,萬居易,王忠瓊,胡蓮,李昌平. 淤膽血清及肝細(xì)胞生長因子體外誘導(dǎo)BMSCs 向肝細(xì)胞分化. 中國修復(fù)重建外科雜志, 2010, 24(3): 344-349. doi: 復(fù)制