目的 構(gòu)建功能化組織工程骨是目前骨組織工程研究過(guò)渡到臨床應(yīng)用的重要方向。通過(guò)組織工程骨的神經(jīng)化構(gòu)建，在體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上探討神經(jīng)因素在骨組織工程中的作用。 方法 5 ～ 6 月齡健康新西蘭大白兔54只，雌雄不限，體重2 ～ 3 kg，從骨髓中分離培養(yǎng)BMSCs；制備兔外周感覺(jué)神經(jīng)勻漿和運(yùn)動(dòng)神經(jīng)勻漿，按1 ∶ 10（V/V）加入LG-DMEM 培養(yǎng)基，培養(yǎng)第2 代BMSCs。對(duì)照組以LG-DMEM 培養(yǎng)基培養(yǎng)。通過(guò)MTT 實(shí)驗(yàn)、ALP 染色和Ⅰ型膠原免疫細(xì)胞化學(xué)染色鑒定，觀察感覺(jué)、運(yùn)動(dòng)神經(jīng)勻漿在體外對(duì)BMSCs 增殖和成骨分化的影響。將體外經(jīng)成骨誘導(dǎo)的BMSCs復(fù)合β 磷酸三鈣（β tricalcium phosphate，β-TCP）制備組織工程骨，植入兔體內(nèi)修復(fù)15 mm 股骨與骨膜缺損。將兔隨機(jī)分為3 組，每組18 只，A 組在β-TCP 生物支架材料的側(cè)槽中植入感覺(jué)神經(jīng)束，B 組植入運(yùn)動(dòng)神經(jīng)束，C 組為單純組織工程骨；分別于術(shù)后4、8、12 周通過(guò)X 線片、骨密度檢測(cè)和免疫組織化學(xué)染色觀察神經(jīng)化組織工程骨的成骨效應(yīng)。 結(jié) 果 MTT法檢測(cè)示，各組吸光度（A）值隨培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)均逐漸增加，從6 d 開(kāi)始，感覺(jué)神經(jīng)組和運(yùn)動(dòng)神經(jīng)組的A 值均低于對(duì)照組（P lt; 0.01）；8 d 和10 d 時(shí)，感覺(jué)神經(jīng)組A 值低于運(yùn)動(dòng)神經(jīng)組（P lt; 0.05）。培養(yǎng)7 d 后，感覺(jué)神經(jīng)組和運(yùn)動(dòng)神經(jīng)組ALP 染色陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)均明顯少于對(duì)照組；培養(yǎng)14 d 后，感覺(jué)神經(jīng)組和運(yùn)動(dòng)神經(jīng)組的細(xì)胞未見(jiàn)Ⅰ型膠原陽(yáng)性表達(dá)，對(duì)照組的細(xì)胞Ⅰ型膠原表達(dá)呈陽(yáng)性。兔大段骨缺損修復(fù)區(qū)的術(shù)后X 線片及Yang 評(píng)分提示，隨著時(shí)間延長(zhǎng)，各組Yang 評(píng)分逐步升高，8 周后A 組評(píng)分高于B、C 組（P lt; 0.01），B、C 組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。術(shù)后12 周骨密度檢測(cè)顯示A 組骨缺損修復(fù)良好，骨密度值高于B、C 組（P lt; 0.01），B、C 組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。術(shù)后12 周組織工程骨成骨局部的免疫組織化學(xué)染色顯示，S-100 在A 組表達(dá)量較高，B 組表達(dá)量較少，C 組偶見(jiàn)表達(dá)；降鈣素基因相關(guān)肽在A 組表達(dá)量高，B、C 組表達(dá)量較少。 結(jié)論 感覺(jué)、運(yùn)動(dòng)神經(jīng)勻漿抑制BMSCs 增殖和成骨分化，神經(jīng)化組織工程骨的成骨和塑形與感覺(jué)神經(jīng)作用更為密切。
引用本文： 江汕 ,劉勇,王秋實(shí),趙培冉,穆天旺,王簕,覃俊君,陳思圓,裴國(guó)獻(xiàn). 組織工程骨神經(jīng)化構(gòu)建及其修復(fù)兔大段骨缺損的實(shí)驗(yàn)研究. 中國(guó)修復(fù)重建外科雜志, 2010, 24(5): 599-605. doi: 復(fù)制