目的 椎間盤退行性變的生物學(xué)治療方法是骨科學(xué)研究熱點(diǎn)，尋找一種有效誘導(dǎo)BMSCs 向椎間盤細(xì)胞分化的方法成為應(yīng)用細(xì)胞移植治療椎間盤退變的必要前提。探討重組質(zhì)粒 pcDNA3.1IE-SOX9Flag 體外轉(zhuǎn)染誘導(dǎo)兔BMSCs 向類髓核細(xì)胞分化的影響。 方法 構(gòu)建真核表達(dá)載體pcDNA3.1IE-SOX9Flag。取1 月齡新西蘭大白兔骨髓分離培養(yǎng)BMSCs，體外誘導(dǎo)BMSCs 向成骨細(xì)胞分化并鑒定；流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面標(biāo)記。將第3 代BMSCs 隨機(jī)分為轉(zhuǎn)染組、陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組。轉(zhuǎn)染組轉(zhuǎn)染pcDNA3.1IE-SOX9Flag 重組質(zhì)粒，陰性對(duì)照組轉(zhuǎn)染質(zhì)粒pcDNA3.1，空白對(duì)照組不轉(zhuǎn)染任何質(zhì)粒。將構(gòu)建好的重組質(zhì)粒pcDNA3.1IE-SOX9Flag 轉(zhuǎn)染第3 代BMSCs，72 h 后加入濃度為500 mg/L 的G418 篩選7 d 后，改為濃度200 mg/L 的G418 維持篩選壓力并培養(yǎng)轉(zhuǎn)染細(xì)胞。取各組BMSCs 采用RT-PCR 檢測(cè)SOX9和Ⅱ型膠原基因（Col2al）的mRNA 表達(dá)，Western blot 檢測(cè)SOX9 蛋白的表達(dá)，免疫組織化學(xué)染色觀察Ⅱ型膠原的表達(dá)。 結(jié)果 BMSCs 成骨誘導(dǎo)7 d 后ALP 染色呈陽(yáng)性；CD44 表達(dá)陽(yáng)性，CD34 和CD45 表達(dá)陰性。成功構(gòu)建了真核表達(dá)載體pcDNA3.1IE-SOX9Flag。將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染兔BMSCs，72 h 后轉(zhuǎn)染效率為34.32% ± 1.75%；轉(zhuǎn)染2 周后BMSCs 形態(tài)改變，呈多角形或橢圓形，細(xì)胞體積增大，增殖速度減緩，與椎間盤髓核細(xì)胞生長(zhǎng)特點(diǎn)十分接近。RT-PCR 鑒定發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染組細(xì)胞SOX9 mRNA 和Col2al mRNA 表達(dá)陽(yáng)性，對(duì)照組均為陰性。Western blot 檢測(cè)發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染組SOX9 基因蛋白表達(dá)陽(yáng)性，對(duì)照組未見(jiàn)表達(dá)。轉(zhuǎn)染組BMSCs 的Ⅱ型膠原免疫組織化學(xué)染色呈陽(yáng)性。 結(jié)論 SOX9 基因真核表達(dá)載體成功轉(zhuǎn)染兔BMSCs，被轉(zhuǎn)染的干細(xì)胞向類髓核細(xì)胞分化，為進(jìn)一步研究應(yīng)用BMSCs 移植治療椎間盤退行性變奠定了理論基礎(chǔ)。
引用本文： 張琦,錢濟(jì)先,文艷華,裘秀春,馬保安,范清宇. SOX9 基因真核表達(dá)載體轉(zhuǎn)染誘導(dǎo)BMSCs分化為類髓核細(xì)胞. 中國(guó)修復(fù)重建外科雜志, 2010, 24(7): 811-816. doi: 復(fù)制