目的 觀察PKH26 與BrdU 體外雙重標(biāo)記兔BMSCs 的生物學(xué)特性，并體外構(gòu)建組織工程心肌補(bǔ)片。 方法 取6 月齡新西蘭大白兔分離培養(yǎng)BMSCs，并用細(xì)胞膜熒光染料PKH26 和細(xì)胞核標(biāo)記物BrdU 對(duì)BMSCs 進(jìn)行標(biāo)記，通過(guò)倒置相差顯微鏡、熒光顯微鏡、流式細(xì)胞儀、MTT 法觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)和熒光標(biāo)記前后細(xì)胞生物學(xué)特性的變化；ALP、茜素紅、油紅O 染色及骨鈣素、Ⅰ型膠原蛋白等免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)檢測(cè)，觀察和評(píng)價(jià)標(biāo)記前后BMSCs 體外分化為成骨細(xì)胞和成脂細(xì)胞的能力。將標(biāo)記細(xì)胞與小腸黏膜下層（small intestinal submucosa，SIS）復(fù)合后共培養(yǎng)5 ～ 7 d 構(gòu)建組織工程心肌補(bǔ)片，在倒置相差顯微鏡、熒光顯微鏡和掃描電鏡下觀察細(xì)胞在SIS 上的生長(zhǎng)情況，并做活體及石蠟包埋HE 染色觀察。 結(jié)果 標(biāo)記后細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好，基本生長(zhǎng)特性無(wú)明顯改變；熒光顯微鏡下可見(jiàn)標(biāo)記后細(xì)胞膜上紅色熒光呈顆粒狀分布；細(xì)胞表面干細(xì)胞標(biāo)志性抗原表達(dá)與標(biāo)記前無(wú)明顯差異。標(biāo)記后的BMSCs 成骨誘導(dǎo)后，ALP、茜素紅染色陽(yáng)性，細(xì)胞表達(dá)骨鈣素及Ⅰ型膠原蛋白；成脂誘導(dǎo)后，細(xì)胞胞漿內(nèi)出現(xiàn)明顯的脂滴。標(biāo)記細(xì)胞與SIS 共培養(yǎng)5 ～ 7 d 后，標(biāo)記細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好，在材料上呈現(xiàn)出多層細(xì)胞結(jié)構(gòu)?；铙w及石蠟包埋后HE 染色可見(jiàn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好。 結(jié)論 兔BMSCs 能被PKH26 和BrdU 穩(wěn)定標(biāo)記；標(biāo)記的細(xì)胞在體外具有自我更新和多向分化的能力；標(biāo)記的BMSCs 與SIS 體外復(fù)合培養(yǎng)可以構(gòu)建組織工程心肌補(bǔ)片。
引用本文： 張玨,智偉,譚美云,陳曉禾,李秀群,鄧力. PKH26 與BrdU 體外雙重標(biāo)記兔BMSCs 在心肌補(bǔ)片中的實(shí)驗(yàn)研究. 中國(guó)修復(fù)重建外科雜志, 2010, 24(7): 828-833. doi: 復(fù)制