目的 端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶（telomerase reverse transcriptase，TERT）是決定細胞生長與壽命的關鍵因素，也與細胞抵制應激和減少凋亡密切相關。通過構建腦神經(jīng)元體外缺氧缺血再灌注（hypoxia-ischemia-reperfusion，HI-RP）模型，探討大鼠TERT 轉(zhuǎn)染星形膠質(zhì)細胞（astrocytes，AS）的培養(yǎng)液對HI 損傷神經(jīng)元的影響。 方法 構建大鼠全長TERT 表達質(zhì)粒pcDNA3-TERT。取20 只新生3 d SD 大鼠處死后取大腦皮層，分離培養(yǎng)AS，通過脂質(zhì)體介導用pcDNA3-TERT 及pcDNA3 轉(zhuǎn)染AS，作為pcDNA3-TERT 轉(zhuǎn)染組及pcDNA3 轉(zhuǎn)染組，以未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的AS（未轉(zhuǎn)染組）作為對照。免疫細胞化學染色檢測各組AS 特異性標志物膠質(zhì)纖維酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein，GFAP）及目的基因TERT的表達。分別收集pcDNA3-TERT 轉(zhuǎn)染組、pcDNA3 轉(zhuǎn)染組、未轉(zhuǎn)染組的AS 條件培養(yǎng)液（astrocyte conditioned medium，ACM），分別為TERT-ACM、p-ACM 及ACM。取60 只新生當天SD 大鼠，處死后取大腦皮層進行神經(jīng)元原代培養(yǎng)，取培養(yǎng)8 ～ 9 d 的大鼠神經(jīng)元隨機分為對照組、ACM 組、p-ACM 組、TERT-ACM 組及正常組。前4 組分別于無血清DMEM培養(yǎng)基及含ACM、p-ACM、TERT-ACM 的無血清DMEM 培養(yǎng)基中進行HI 培養(yǎng)3 h 后，再體外模擬RP 3、6、18、24、36 h；正常組神經(jīng)元不作處理。采用MTT 法測定神經(jīng)元存活率、比色法測定神經(jīng)元培養(yǎng)液中乳酸脫氧酶（loctate dehydrogenase，LDH）活性、TUNEL 法檢測神經(jīng)元凋亡情況。 結果 免疫細胞化學染色示，未轉(zhuǎn)染組、pcDNA3-TERT 轉(zhuǎn)染組及pcDNA3 轉(zhuǎn)染組的GFAP 陽性細胞百分率分別為98%、99%、98%；未轉(zhuǎn)染組與pcDNA3 組未見TERT 表達，pcDNA3-TERT 轉(zhuǎn)染組TERT 陽性細胞百分率達98%。MTT 檢測顯示，對照組、ACM 組、p-ACM 組及TERT-ACM 組神經(jīng)元存活率均較正常組降低，其LDH 活性及TUNEL 檢測凋亡指數(shù)均較正常組增高，差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）。ACM 組、p-ACM 組與對照組比較，在HI 3 h 及RP 3 h 神經(jīng)元存活率均增高，LDH 活性及凋亡指數(shù)均降低，差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）；但之后各時間點各項指標差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。各時間點TERT-ACM 組與對照組、ACM 組和p-ACM 組比較，神經(jīng)元存活率均增高，LDH 活性及凋亡指數(shù)均降低，差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）；各時間點p-ACM 組與ACM 組各項指標比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。 結論 經(jīng)質(zhì)粒pcDNA3-TERT 轉(zhuǎn)染AS 培養(yǎng)液處理的大鼠神經(jīng)元對HI 損傷有更強的耐受性，轉(zhuǎn)染AS 培養(yǎng)液可能對HI 神經(jīng)元具有保護作用。
引用本文： 段周謹,屈藝,趙鳳艷,唐彬秩,李姣,母得志. 大鼠端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶轉(zhuǎn)染星形膠質(zhì)細胞培養(yǎng)液對缺氧缺血神經(jīng)元的保護作用. 中國修復重建外科雜志, 2010, 24(10): 1217-1223. doi: 復制