• 首都醫(yī)科大學(xué)宣武醫(yī)院血管外科 血管外科研究所(北京,100053);

目的 采用簡(jiǎn)單貼壁培養(yǎng)方法誘導(dǎo)胚胎干細(xì)胞(embryonic stem cell,ESC)分化為內(nèi)皮樣細(xì)胞,為組織工程血管及細(xì)胞替代治療提供新的種子細(xì)胞。 方法 小鼠ESC 株SV129 按2 × 104 個(gè)/cm2 密度傳代培養(yǎng),采用ESC培養(yǎng)基添加1 000 U/mL 白血病抑制因子(leukaemia inhibitory factor,LIF)維持其未分化狀態(tài)。撤除LIF,ESC 懸浮培養(yǎng)形成擬胚體(embryoid body,EB),將培養(yǎng)第4 天的EB 置于含VEGF 的培養(yǎng)基中貼壁培養(yǎng),誘導(dǎo)分化。采用免疫組織化學(xué)染色、流式細(xì)胞儀分析、DiI 標(biāo)記的乙?;兔芏戎鞍祝?,1-dioctadecyl-3,3,3,3-tetramethylindocarbocyanine-labeled acetylated low density lipoprotein,DiI-Ac-LDL)攝取實(shí)驗(yàn)以及透射電鏡檢查鑒定分化細(xì)胞的性質(zhì)。 結(jié)果 分化產(chǎn)生的內(nèi)皮樣細(xì)胞具有內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)特征,能攝取DiI-Ac-LDL。ESC 誘導(dǎo)分化培養(yǎng)產(chǎn)生的第15 代細(xì)胞免疫組織化學(xué)染色呈Flk-1 和CD31 陽(yáng)性;流式細(xì)胞儀檢測(cè)ESC 傳至9 代后CD31 陽(yáng)性細(xì)胞 gt; 90%;透射電鏡可見(jiàn)懷布爾- 帕拉德體及內(nèi)皮細(xì)胞間緊密連接。 結(jié)論 采用簡(jiǎn)單貼壁培養(yǎng)的方法,單獨(dú)使用VEGF 即可誘導(dǎo)ESC 分化為內(nèi)皮樣細(xì)胞。誘導(dǎo)培養(yǎng)方法操作簡(jiǎn)便,經(jīng)濟(jì)實(shí)用,可為組織工程血管及細(xì)胞替代治療提供所需內(nèi)皮樣細(xì)胞

引用本文: 張斌,谷涌泉,佟鑄,楊盛家,郝立松,張淑文,汪忠鎬. 鼠胚胎干細(xì)胞誘導(dǎo)分化內(nèi)皮樣細(xì)胞. 中國(guó)修復(fù)重建外科雜志, 2009, 23(1): 82-86. doi: 復(fù)制