目的 探討應(yīng)用生長(zhǎng)分化因子5（growth differentiation factor 5，GDF-5）誘導(dǎo)脂肪干細(xì)胞（adiposederived stem cells，ADSCs）成軟骨細(xì)胞分化的可能性及效果。 方法 3 月齡清潔級(jí)健康日本大耳白兔6 只，雌雄不限，體重2 ～ 3 kg。取兔皮下脂肪4 ～ 6 mL，采用膠原酶消化離心貼壁培養(yǎng)法培養(yǎng)ADSCs，取第3 代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。波形蛋白免疫組織化學(xué)和CD44、CD49d、CD106 免疫熒光染色鑒定ADSCs。調(diào)整細(xì)胞密度為1 × 106 個(gè)/mL，分別用普通細(xì)胞培養(yǎng)液以及含0、10 、100 ng/mL GDF-5 的軟骨細(xì)胞誘導(dǎo)液誘導(dǎo)培養(yǎng)。倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化；MTT 法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況；RT-PCR 檢測(cè)誘導(dǎo)細(xì)胞Col Ⅱ和蛋白多糖mRNA 的表達(dá)；免疫組織化學(xué)、阿利新藍(lán)染色、甲苯胺藍(lán)染色和Western blot 法檢測(cè)誘導(dǎo)細(xì)胞Col Ⅱ和蛋白多糖表達(dá)。 結(jié)果 ADSCs 呈小圓形、梭形、多角形分布，表面抗原標(biāo)志CD44、CD49d 呈陽(yáng)性表達(dá)，CD106 和波形蛋白呈陰性表達(dá)。100 ng/mL GDF-5 誘導(dǎo)的ADSCs 呈圓形或類圓形，且細(xì)胞增殖旺盛。普通培養(yǎng)液和0、10、100 ng/mL GDF-5 成軟骨細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)后7 d，Col Ⅱ、蛋白多糖 mRNA 表達(dá)均呈濃度依賴性增加，除0、10 ng/mL GDF-5 兩組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）外，其余各組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）；100 ng/ mL GDF-5 誘導(dǎo)培養(yǎng)14 d，Col Ⅱ、蛋白多糖mRNA 以及蛋白表達(dá)達(dá)高峰，阿利新藍(lán)、甲苯胺藍(lán)染色以及Col Ⅱ免疫組織化學(xué)染色均呈陽(yáng)性。 結(jié)論 經(jīng)一定濃度的GDF-5 誘導(dǎo)的ADSCs，Col Ⅱ和蛋白多糖表達(dá)明顯增加，具有軟骨細(xì)胞的部分生物學(xué)功能。
引用本文： 劉振寧,賈長(zhǎng)青,韓長(zhǎng)旭,梁峰,王俊豐,柏樹令,佟浩. 生長(zhǎng)分化因子5 誘導(dǎo)兔脂肪干細(xì)胞成軟骨細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究. 中國(guó)修復(fù)重建外科雜志, 2009, 23(4): 483-489. doi: 復(fù)制
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