分離培養(yǎng)脂肪來源干細(xì)胞（adipose-derived stem cells，ADSCs），探討胰島素刺激前后其分泌因子的變化及對(duì)人角質(zhì)形成細(xì)胞株 HaCaT 細(xì)胞生物學(xué)影響。 方法 從腹部外科手術(shù)患者自愿捐獻(xiàn)皮下脂肪組織中分離、培養(yǎng) ADSCs，取第3 代ADSCs 調(diào)整密度為 5 × 104 個(gè)/mL，采用1 × 10-7 mol/L 胰島素刺激作為A 組，以未加胰島素刺激作為B 組，培養(yǎng)3 d 后收集兩組ADSCs 培養(yǎng)上清液（conditioned medium of ADSCs，ADSC-CM），ELISA 法測(cè)定其VEGF、肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子（hepatocyte growth factor，HGF）含量。取人角質(zhì)形成細(xì)胞株 HaCaT 細(xì)胞培養(yǎng)，將第4 代細(xì)胞根據(jù)培養(yǎng)液不同分為4 組。A1 組：含A 組ADSC-CM 和2% FBS 各0.5 mL；B1 組：含B 組ADSC-CM 和2% FBS 各0.5 mL；C1組：1 mL 含終濃度為1 × 10-7 mol/L 胰島素的2%FBS；D1 組：僅含2%FBS 1 mL。培養(yǎng)3 d 采用MTT 法測(cè)定HaCaT 細(xì)胞增殖情況；培養(yǎng)12 h Annexin V-FITC 雙染測(cè)定細(xì)胞凋亡情況；培養(yǎng)0、12、24、36、48 h 采用體外細(xì)胞劃痕法測(cè)定其遷移能力。 結(jié)果 A 組 VEGF、HGF 含量分別為（643.28 ± 63.57）、（929.95 ± 67.52）pg/mL，B 組分別為（286.52 ± 46.68）、（576.61 ± 84.29） pg/mL，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。細(xì)胞增殖測(cè)定A1、B1 組吸光度值分別為0.881 ± 0.039、0.804 ± 0.041，與C1 組（0.663 ± 0.027）及D1 組（0.652 ± 0.042）比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.01）；A1 組高于B1 組（P lt; 0.05）。A1、B1 組凋亡率分別為5.23% ± 1.98%、8.82% ± 2.59%，均低于C1 組（31.70% ± 8.85%）和D1 組（29.60% ±8.41%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05），但B1 組凋亡率高于A1 組（P lt; 0.05）。A1 、B1、C1 和D1 組36 h 遷移距離分別為（0.184 6 ± 0.019 2）、（0.159 8 ± 0.029 4）、（0.059 2 ± 0.017 6） 及（0.058 2 ± 0.012 3）mm，48 h 分別為（0.231 8 ± 0.174 0）、（0.205 1 ± 0.012 1）、（0.079 2 ± 0.008 1）及（0.078 4 ± 0.011 7）mm，兩時(shí)間點(diǎn)A1 組和B1 組距離明顯大于C1 組和D1 組（P lt; 0.01），A1 組大于B1 組（P lt; 0.05）；其他時(shí)間點(diǎn)遷移距離差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。 結(jié)論 胰島素干預(yù)后ADSCs能更有效促進(jìn) HaCaT 細(xì)胞增殖、遷移和抑制凋亡。
引用本文： 折濤,胡大海,張軍,張萬福,劉佳琦,陳剛,蔡維霞,張戰(zhàn)鳳. 胰島素干預(yù)后脂肪來源干細(xì)胞分泌功能對(duì)HaCaT 細(xì)胞生物學(xué)影響. 中國修復(fù)重建外科雜志, 2009, 23(6): 727-731. doi: 復(fù)制