目的 探討SD 大鼠骨骼肌脫細(xì)胞的優(yōu)化處理方法。 方法 SD 大鼠16 只，雌雄不限，體重180 ～ 200 g。取其中10 只大鼠36 條骨骼肌肌束，隨機(jī)分為3 組，正常組（A 組，n=4）：不作脫細(xì)胞處理；時間組（T 組）及濃度組（C 組）按照低滲- 去垢劑方法進(jìn)行脫細(xì)胞處理（n=16），其中T 組十二烷基磺酸鈉（sodium dodecyl sulfate，SDS）濃度均為1.0%，根據(jù)處理時間不同（24、48、72、96 h），分為T1、T2、T3、T4 組（n=4）；C 組處理時間均為48 h，根據(jù)SDS濃度不同（0.5%、1.0%、1.5%、2.0%）分為C1、C2、C3、C4 組（n=4）。取各組材料行HE 染色觀察及羥脯氨酸含量檢測，并根據(jù)結(jié)果篩選最優(yōu)脫細(xì)胞處理?xiàng)l件。另取6 只SD 大鼠14 條完整肌束，隨機(jī)取7 條按照最優(yōu)條件進(jìn)行脫細(xì)胞處理（實(shí)驗(yàn)組），余7 條作為正常對照（對照組），對肌束行大體觀察、Masson 染色及生物力學(xué)檢測。 結(jié)果 HE 染色顯示T1、T2、C1、C2、C3 組肌纖維與A 組無差異；C4 組肌纖維部分脫除；T3 組肌纖維完全脫除且基膜結(jié)構(gòu)保留完整；T4 組肌纖維完全脫除但基膜結(jié)構(gòu)部分被破壞。羥脯氨酸含量檢測：A 組與C1、C2、C3、T1 及T2 組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P  gt; 0.05）；A 組與C4、T3 和T4 組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P  lt; 0.05）；C4 組與T3、T4 組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P  lt; 0.05）；T3 組和T4 組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P  gt; 0.05）。根據(jù)HE 染色及羥脯氨酸含量檢測實(shí)驗(yàn)結(jié)果篩選出最優(yōu)脫細(xì)胞處理?xiàng)l件為4℃、1.0% SDS、72 h。大體觀察：實(shí)驗(yàn)組與對照組比較肌束顏色變淺，呈半透明狀，且結(jié)構(gòu)相對較松散。Masson 染色觀察：實(shí)驗(yàn)組膠原纖維連續(xù)性良好，較對照組結(jié)構(gòu)疏松。生物力學(xué)測試：實(shí)驗(yàn)組及對照組最大破壞載荷分別為（1.38 ± 0.35） N及（1.98 ± 0.77）N，最大拉伸位移分別為（3.19 ± 3.23）mm 及（3.56 ± 2.17）mm，兩組以上指標(biāo)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P  gt; 0.05）。 結(jié)論 應(yīng)用1.0% SDS，于4℃條件下對大鼠骨骼肌經(jīng)震蕩處理72 h 可得到完全去除肌纖維且ECM 保留完好的脫細(xì)胞基質(zhì)。

引用本文： 卿泉,秦廷武. 大鼠骨骼肌脫細(xì)胞處理方法的優(yōu)化研究. 中國修復(fù)重建外科雜志, 2009, 23(7): 836-839. doi: 復(fù)制