目的 研究PRP 對(duì)兔BMSCs 在體外向SC 分化中的作用，并對(duì)分化細(xì)胞的分泌功能進(jìn)行檢測(cè)。 方法 取2 月齡新西蘭大白兔骨髓5 mL，應(yīng)用密度梯度離心和貼壁篩選方法分離培養(yǎng)BMSCs。取兔股靜脈血5 mL，采用改良Appel 法制備PRP。取第3 代BMSCs 分為3 組，聯(lián)合誘導(dǎo)組：采用β- 巰基乙醇和維甲酸序貫誘導(dǎo)后用含PRP 完全培養(yǎng)基培養(yǎng)；單純誘導(dǎo)組：行β- 巰基乙醇和維甲酸序貫誘導(dǎo)后，采用不含PRP 的L-DMEM 完全培養(yǎng)基培養(yǎng)；對(duì)照組：不行誘導(dǎo)，僅采用L-DMEM 完全培養(yǎng)基培養(yǎng)。倒置顯微鏡下觀察各組細(xì)胞生長(zhǎng)情況，于培養(yǎng)4、7、9、11 d 采用免疫熒光染色法對(duì)細(xì)胞進(jìn)行鑒定，ELISA 法檢測(cè)NGF 含量，并于培養(yǎng)11 d 行RT-PCR 檢測(cè)NGF mRNA 表達(dá)。 結(jié)果 聯(lián)合誘導(dǎo)組和單純誘導(dǎo)組培養(yǎng)4 d，大部分細(xì)胞不具備BMSCs 典型細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)；9 d 聯(lián)合誘導(dǎo)組細(xì)胞均不具備BMSCs 典型細(xì)胞形態(tài)，呈類似SC 形態(tài)和外觀；對(duì)照組細(xì)胞形態(tài)一直無明顯改變。聯(lián)合誘導(dǎo)組和單純誘導(dǎo)組誘導(dǎo)培養(yǎng)后，各時(shí)間點(diǎn)均有S-100 蛋白表達(dá)；隨時(shí)間延長(zhǎng)，兩組陽性表達(dá)率逐漸提高；培養(yǎng)7、9、11 d，聯(lián)合誘導(dǎo)組與單純誘導(dǎo)組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）；對(duì)照組表達(dá)呈陰性。培養(yǎng)后4、7、9、11 d，NGF 含量聯(lián)合誘導(dǎo)組和單純誘導(dǎo)組與對(duì)照組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.01）；培養(yǎng)4 d 聯(lián)合誘導(dǎo)組與單純誘導(dǎo)組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）；培養(yǎng)7、9 和11 d，聯(lián)合誘導(dǎo)組與單純誘導(dǎo)組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。培養(yǎng)11 d，NGF mRNA 表達(dá)相對(duì)強(qiáng)度聯(lián)合誘導(dǎo)組較單純誘導(dǎo)組高，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。 結(jié)論 兔BMSCs 在體外一定條件下能誘導(dǎo)分化為可分泌NGF 的SC；誘導(dǎo)培養(yǎng)時(shí)聯(lián)合PRP 能明顯提高BMSCs 向SC 誘導(dǎo)的效率。
引用本文： 夏長(zhǎng)所,陳玉華,孫康,田少奇,楊選影,洪光祥. PRP 在BMSCs 向SC 體外分化中的作用. 中國(guó)修復(fù)重建外科雜志, 2009, 23(8): 997-1001. doi: 復(fù)制