目的 探討大鼠BMSCs 來(lái)源的成骨細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞復(fù)合異體凍干顆粒骨的黏附性，為構(gòu)建血管化組織工程骨奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 方法 取4 周齡SD 大鼠，雌雄不限，體重100 ～ 110 g，分離培養(yǎng)BMSCs，取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的第3 代BMSCs 行成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)及成血管內(nèi)皮細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)并鑒定。將誘導(dǎo)7 d 的兩種細(xì)胞按1 ∶ 1 比例混合培養(yǎng)，作為實(shí)驗(yàn)組；以生長(zhǎng)狀態(tài)良好未誘導(dǎo)的第2 代BMSCs 作為對(duì)照組。培養(yǎng)后1 ～ 8 d 采用 MTT 法測(cè)定細(xì)胞增殖并繪制生長(zhǎng)曲線。取誘導(dǎo)14 d 的兩種細(xì)胞分別按0.25 × 106、0.50 × 106、1.00 × 106、2.00 × 106、4.00 × 106 個(gè)/mL 接種于20% Col Ⅰ修飾前后的異體凍干顆粒骨（修飾組與未修飾組），接種后24 h 計(jì)算細(xì)胞黏附率。將誘導(dǎo)14 d 的兩種細(xì)胞按1 ∶ 1 比例混合，以總細(xì)胞密度2 × 106 個(gè)/mL 接種于修飾后異體凍干顆粒骨，掃描電鏡觀察細(xì)胞在支架上的生長(zhǎng)情況。 結(jié) 果 BM SCs 成骨誘導(dǎo)7 d，ALP 染色示胞漿內(nèi)可見(jiàn)藍(lán)染顆粒，胞核呈紅色；成血管內(nèi)皮細(xì)胞誘導(dǎo)14 d，CD31、CD34 免疫細(xì)胞化學(xué)染色呈陽(yáng)性。MTT 檢測(cè)結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞增殖較對(duì)照組緩慢，培養(yǎng)3 ～ 8 d 兩組細(xì)胞吸光度值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。細(xì)胞接種密度為（0.25 ～ 1.00）× 106個(gè)/mL 時(shí)，兩組黏附率隨接種密度增加而上升；接種密度為1.00 × 106個(gè)/mL 時(shí)，黏附率達(dá)最高；當(dāng)接種密度 gt; 2.00 × 106個(gè)/mL，黏附率明顯降低。兩組各細(xì)胞接種密度間的黏附率比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。掃描電鏡觀察顯示，體外誘導(dǎo)的成骨細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞黏附于支架上仍可分化增殖，細(xì)胞胞體見(jiàn)絲狀偽足。 結(jié)論 大鼠BMSCs 誘導(dǎo)培養(yǎng)的成骨細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞在20% Col Ⅰ修飾的異體凍干顆粒骨上生長(zhǎng)狀態(tài)良好，可用于構(gòu)建血管化組織工程骨。
引用本文： 陳超,李琪佳,孫瑞軍,白俊清,王志強(qiáng). BMSCs 來(lái)源的成骨細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞復(fù)合異體凍干顆粒骨的黏附性研究. 中國(guó)修復(fù)重建外科雜志, 2009, 23(9): 1129-1133. doi: 復(fù)制