• 1 天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院腦外科(天津,300193);;
  • 2 天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院骨科;

目的 觀察大鼠臍帶華通膠來源MSCs(umbilical cord MSCs,UCMSCs)體外培養(yǎng)特性及其對大鼠脊髓損傷(spinal cord injury,SCI)后神經(jīng)再生的作用。 方法 取足天Wistar 孕鼠臍帶分離、培養(yǎng)UCMSCs,體外擴增并采用流式細胞儀鑒定。細胞移植前1 d 取第5 代細胞以Hoechst 33258 染液標(biāo)記,調(diào)整終濃度為1 × 105 個/μL 備用。另取成年雌性Wistar 大鼠60 只,體重(300 ± 10)g,隨機分為3 組,每組20 只。A、B 組以Impactor model- Ⅱ型打擊器制備大鼠T10 SCI 模型,并分別于損傷區(qū)注射1 μL 標(biāo)記后的細胞懸液和等量DMEM 培養(yǎng)液;C 組行單純椎板減壓,不予脊髓打擊及治療措施。于術(shù)后1 d,1、2、3、4、5、6 周,采用BBB評分法行肢體功能評分;術(shù)后6 周行神經(jīng)絲蛋白200(neurofilament 200,NF-200)免疫組織化學(xué)染色觀察細胞分化情況;術(shù)后10 周行生物素葡聚糖胺(biotinylated dextran amine,BDA)順行示蹤觀察皮質(zhì)脊髓束(corticospinal tract,CST)再生情況。 結(jié)果 培養(yǎng)的UCMSCs 為梭形細胞,呈漩渦狀或平行貼壁生長。流式細胞儀檢測顯示,UCMSCs 表達CD29,不表達CD31、CD45 及HLA-DR。術(shù)后A、B 組BBB 評分均明顯上升,3 周后A 組BBB 評分明顯高于B 組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P  lt; 0.05);各時間點A、B 組評分均低于C 組(P  lt; 0.05)。術(shù)后6 周,熒光顯微鏡觀察可見Hoechst 33258 染液標(biāo)記的UCMSCs 存活并向損傷區(qū)聚集;A、C 組NF-200 免疫熒光染色陽性面積分別為(11 943 ± 856)像素及(13 117 ± 945)像素,明顯高于B 組的(7 986 ± 627)像素,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P  lt; 0.05);A、 C 組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P  gt; 0.05)。BDA 順行神經(jīng)示蹤觀察顯示,術(shù)后10 周A 組部分CST 再生神經(jīng)纖維可延伸至損傷區(qū)遠端;B 組神經(jīng)纖維極少通過損傷空洞;C 組CST 纖維在對側(cè)脊髓白質(zhì)后索中行走。A、B 組各點再生軸突數(shù)與T5橫斷面陽性染色軸突百分比與C 組比較,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P  lt; 0.05)。 結(jié)論 UCMSCs 能在體外快速增殖,移植后在大鼠SCI 部位存活并向神經(jīng)細胞分化,可有效促進SCI 后運動功能恢復(fù)和神經(jīng)軸突再生。

引用本文: 朱玉海,馮世慶,王雪. 大鼠臍帶華通膠來源MSCs 修復(fù)脊髓損傷的實驗研究. 中國修復(fù)重建外科雜志, 2009, 23(12): 1491-1496. doi: 復(fù)制