【摘 要】 目的 通過改進(jìn)胰腺消化和分離的技術(shù)條件，提高成年大鼠胰島分離純化產(chǎn)率和質(zhì)量。 方法 用膠原酶Ⅺ液灌注消化成年SD 大鼠胰腺，對胰島分離純化方法加以改進(jìn)：以4 種比重的Euro-Ficoll（F1：D=1.132，F(xiàn)2：D=1.108，F(xiàn)4：D=1.069）和Hank’s 液（F5：D=1.023）不連續(xù)密度梯度離心，以離心半徑15 cm，2 000 r/min 于4℃緩慢升降離心20 min，收集位于F1 和F2 界面的胰島。雙硫腙特異染色法鑒定胰島純度；二醋酸酯熒光素/ 碘化丙啶染色法計算胰島成活率；放射免疫分析法檢測葡萄糖刺激的胰島素分泌量，計算刺激指數(shù)。將胰島當(dāng)量（islets equivalent quantity，IEQ）為1 000 的胰島移植于同品系糖尿病大鼠腎包膜下，9 d 內(nèi)隔日觀察動物血糖的變化，評價胰島功能。比較分離條件優(yōu)化前后收獲胰島的產(chǎn)率和質(zhì)量。 結(jié)果 改進(jìn)純化方法后每只大鼠胰島收獲量為（920±122）IEQ，胰島純度 gt; 90%，胰島細(xì)胞成活率為 91%±2%。胰島細(xì)胞功能良好，在低糖和高糖刺激后培養(yǎng)液中胰島素濃度分別為（18.25±0.32）mU/L 和（36.70±3.57）mU/L，刺激指數(shù)為2.01±0.15。1 000 IEQ 胰島移植于糖尿病大鼠腎包膜下，觀察期內(nèi)可維持動物血糖水平正常。 結(jié)論 改進(jìn)后的膠原酶灌注消化和不連續(xù)梯度離心方法提高了胰島的產(chǎn)率，保證了胰島的高純度及高成活率。
引用本文： 袁宇,叢聰,張靜,魏玲玲,李勝富,金熙,麥剛,李幼平,程驚秋,陸燕蓉. 大鼠胰島的分離純化方法改進(jìn)與功能鑒定. 中國修復(fù)重建外科雜志, 2008, 22(1): 75-79. doi: 復(fù)制