構(gòu)建含人IL-1 受體拮抗蛋白（IL-1 receptor antagonist，IL-1Ra）逆轉(zhuǎn)錄病毒表達載體（PLXRNIL-1Ra），體外轉(zhuǎn)染人骨關節(jié)炎（osteoarthritis，OA）軟骨細胞，研究其相關特性。 方法 利用細菌內(nèi)同源重組技術快速構(gòu)建PLXRN-IL-1Ra 逆轉(zhuǎn)錄病毒重組質(zhì)粒，經(jīng)測序及酶切鑒定正確后轉(zhuǎn)染PT67 細胞，包裝成為重組PLXRN-IL-1Ra 逆轉(zhuǎn)錄病毒，并使用小鼠腎成纖維細胞系NIH/3T3 對病毒進行滴度測定。實驗分為3 組：未轉(zhuǎn)染組（A 組）、PLXRN 空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組（B 組）、PLXRN-IL-1Ra 轉(zhuǎn)染組（C 組），病毒感染人OA 軟骨細胞后，RT-PCR 檢測細胞內(nèi)IL-1Ra 基因的轉(zhuǎn)錄和表達；ELISA 法檢測細胞培養(yǎng)上清液中人IL-1Ra 蛋白表達。 結(jié)果 酶切鑒定及基因測序證實重組逆轉(zhuǎn)錄病毒質(zhì)粒中含有人IL-1Ra cDNA，測定包裝的病毒滴度為3 × 104 CFU/mL。原代軟骨細胞體外培養(yǎng)呈多角形或梭形，甲苯胺藍染色見細胞內(nèi)有紫色異染顆粒。RT-PCR 結(jié)果顯示在C 組出現(xiàn)311 bp 人IL-1Ra mRNA 片段，A、B 組未見人IL-1Ra mRNA 的表達帶，GAPDH 在各組均有表達。ELISA 檢測發(fā)現(xiàn)C 組細胞上清有一定量的人IL-1Ra 表達，蛋白濃度為（60.47 ± 15.13）ng/L，A 組和B 組均無人IL-1Ra 表達。 結(jié)論 構(gòu)建的IL-1Ra 逆轉(zhuǎn)錄病毒表達載體成功地感染人OA 軟骨細胞，并在體外獲得穩(wěn)定表達，為將表達人IL-1Ra 基因的人OA 軟骨細胞用于OA 基因治療提供了實驗依據(jù)。
引用本文： 芮云峰,王友,張曉玲,孫紅立,曲志虎,戴尅戎. 人IL-1 受體拮抗蛋白重組逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的構(gòu)建、鑒定及在骨關節(jié)炎軟骨細胞中的表達. 中國修復重建外科雜志, 2008, 22(5): 533-538. doi: 復制
版權信息： ?四川大學華西醫(yī)院華西期刊社《中國修復重建外科雜志》版權所有，未經(jīng)授權不得轉(zhuǎn)載、改編