建立一種經(jīng)濟高效的大鼠胰島細胞分離純化方法，為胰腺的修復(fù)重建奠定實驗基礎(chǔ)。 方 法 成年雄性SD 大鼠25 只，體重230 ～ 380 g，共進行5 次實驗，每5 只大鼠一組進行消化和分離。采用醫(yī)用復(fù)方氯化鈉注射液（compound sodium chloride injection，CSCI）經(jīng)胰總管灌注大鼠胰腺，0.5 mg/mL Ⅴ型膠原酶消化后，分別采用濃度為27.0%、23.0%、20.5%和11.0%的 Ficoll 400 形成不連續(xù)密度梯度介質(zhì)，離心純化胰島細胞。雙硫腙（dithizon，DTZ）染色行純化前后胰島細胞計數(shù)和純度檢測；熒光染料碘化丙啶（propidium iodide，PI）和二乙酸熒光素（fluorescein diacetate，F(xiàn)DA）儲存液雙染色鑒定胰島細胞活性；RPMI1640 培養(yǎng)基培養(yǎng)3 d 后，分別用濃度為2.8 mmol/L 的低糖和25.0 mmol/L 的高糖行葡萄糖刺激胰島素釋放實驗檢測胰島細胞功能。 結(jié)果 5 次實驗胰島細胞消化時間為（13.8 ± 1.6） min。DTZ 染色鑒定純化前胰島細胞數(shù)為（5 626 ± 422）個，純化后為（2 914 ± 485）個，純化后的胰島細胞數(shù)較純化前明顯減少（P lt; 0.01），回收率51.6% ± 6.0%，每個胰腺收獲胰島細胞數(shù)為（583 ± 97）個/ 只。5 次分離獲得的胰島細胞純度為90.2% ± 3.4%，活性為81.6% ± 7.0%。培養(yǎng)3 d 后，葡萄糖刺激胰島素釋放實驗顯示：低糖環(huán)境下胰島素水平為（39.7 ± 7.5）EU/L，高糖環(huán)境為（116.1 ± 17.4）EU/L，比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.01）；刺激指數(shù)為3.0 ± 0.4。 結(jié) 論 采用CSCI 作為大鼠胰島細胞分離純化的主要液體試劑，并采用低濃度Ⅴ型膠原酶消化，不僅可降低實驗成本，同時可獲得高質(zhì)量的胰島細胞。
引用本文： 張劍波,楊謙,陳杰,母得志,張林,毛萌,屈藝. 一種經(jīng)濟高效的SD 大鼠胰島細胞分離技術(shù). 中國修復(fù)重建外科雜志, 2008, 22(5): 610-613. doi: 復(fù)制