【摘 要】 目的 觀察血小板裂解液（platelet lysate，PL）對(duì)大鼠BMSCs 成骨誘導(dǎo)分化的干預(yù)效應(yīng)。 方法 成年健康清潔級(jí)Wistar 大鼠24 只，體重250 ～ 300 g，雌雄不限。取16 只大鼠心內(nèi)采血，采用3 次離心結(jié)合反復(fù)凍融法制備PL，ELISA 法測(cè)定PL 中PDGF、TGF-β1、IGF-1 和VEGF 含量。另取8 只大鼠，采用全骨髓分離培養(yǎng)法擴(kuò)增傳代BM SCs，取第4 代細(xì)胞按1 × 104/cm2 接種行成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)。按誘導(dǎo)培養(yǎng)液的不同，實(shí)驗(yàn)分為3 組，A、B 組基礎(chǔ)誘導(dǎo)培養(yǎng)基中分別含終濃度為5% 和1% 的PL，C 組僅含基礎(chǔ)誘導(dǎo)培養(yǎng)基。倒置相差顯微鏡動(dòng)態(tài)觀察各組細(xì)胞形態(tài)變化及生長(zhǎng)狀況；誘導(dǎo)培養(yǎng)7 d，各組行ALP 染色；誘導(dǎo)培養(yǎng)2、8、10 d，ALP/ 總蛋白含量確定ALP 活性；誘導(dǎo)培養(yǎng)20 d，茜素紅染色觀察礦化結(jié)節(jié)形成并定量分析。 結(jié)果 PL 中PDGF、TGF-β1、IGF-1 和VEGF 含量分別為（300 ± 30）、（140 ± 25）、（80 ± 35）和（70 ± 20）pg/mL。倒置相差顯微鏡觀察，各組BMSCs 形態(tài)逐漸發(fā)生改變，出現(xiàn)類成骨細(xì)胞樣形態(tài)特征；A 組細(xì)胞形態(tài)變化不及B、C 組明顯，但細(xì)胞增殖較快；20 d A 組細(xì)胞仍密集生長(zhǎng)，ECM 中形成的礦物沉積顯著少于B、C 組。誘導(dǎo)培養(yǎng)7 d，A 組細(xì)胞胞漿中有少量顆粒，ALP 染色呈弱陽(yáng)性；B、C 組細(xì)胞胞漿中有大量棕褐色顆粒，ALP 染色呈強(qiáng)陽(yáng)性。誘導(dǎo)培養(yǎng)2、8、10 d，ALP 活性定量分析示A 組顯著低于B 組和C 組（P lt; 0.05）。誘導(dǎo)培養(yǎng)20 d，茜素紅染色顯示A、B、C 組鈣結(jié)節(jié)數(shù)量分別為（7.67 ± 1.10）、（12.87 ± 0.81）和（15.59 ± 1.25）個(gè)；礦化結(jié)節(jié)面積分別為（161 778.70 ± 44 550.80）、（337 349.70 ± 56 083.24）和（415 921.70 ± 71 725.39）像素；A 組均明顯低于B 組和C 組（P lt; 0.05），B、C 組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。 結(jié)論 PL 是多種生長(zhǎng)因子的承載體系，以劑量依賴方式抑制BMSCs 成骨誘導(dǎo)中ALP 活性和礦化結(jié)節(jié)形成。
引用本文： 宋會(huì)平,王志強(qiáng),趙亞平,陳學(xué)英,張育敏,李寶興. 血小板裂解液對(duì)大鼠BMSCs 成骨分化的干預(yù)效應(yīng). 中國(guó)修復(fù)重建外科雜志, 2008, 22(6): 737-741. doi: 復(fù)制