• 1 四川大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院(成都,610041);;
  • 2 四川大學(xué)華西醫(yī)院 生物治療國家重點實驗室· 干細(xì)胞與組織工程研究室,3 腫瘤生物治療研究室;

【摘 要】 目的 應(yīng)用不同來源的成肌細(xì)胞(myoblast,Mb)研究肌球蛋白輕鏈(myosin light chain,Myl)在肌肉
再生中的作用,為進(jìn)一步了解Myl 的生理功能提供依據(jù)。 方法 3 周齡健康雄性C57BL/6 小鼠12 只。采用酶消化法和
Preplate 技術(shù)分離純化小鼠眼外肌、膈肌和腓腸肌Mb(eMb、dMb 和gMb),進(jìn)行傳代培養(yǎng)。采用RT-PCR 和Western blot
法檢測第1 代細(xì)胞Myl 的表達(dá),亞甲基藍(lán)法檢測細(xì)胞增殖能力,倒置相差顯微鏡觀察肌管形成情況。采用濃度為1、2、4、8、
16 ng/mL Myl 單克隆抗體分別處理3 種細(xì)胞(實驗組),與未處理的細(xì)胞比較(對照組),觀察細(xì)胞增殖能力及肌管形成的變
化。 結(jié)果 培養(yǎng)24 h 的eMb、dMb 和gMb 均檢測到Myl1、Myl4 mRNA 和Myl 蛋白表達(dá),且eMb 的表達(dá)水平顯著低
于dMb 和gMb(P  lt; 0.01),dMb 和gMb 間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P  gt; 0.05) ;3 種細(xì)胞均未檢測到Myl2 和 Myl3 mRNA 表達(dá)。eMb 的增殖速度高于dMb 和gMb(P  lt; 0.01);eMb 和dMb、gMb 分別在接種后40 h 和16 h 出現(xiàn)肌管;第6 天eMb 肌管
數(shù)為(137.2 ± 24.5)/ 視野,顯著高于dMb 的(47.6 ± 15.5)/ 視野和gMb 的(39.8 ± 5.1)/ 視野(P  lt; 0.01),后兩者差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P  gt; 0.05)。Myl 抗體作用后,3 種細(xì)胞實驗組各濃度吸光度值均顯著高于對照組(P  lt; 0.05),表現(xiàn)濃度依賴性;dMb 實驗組和對照組16 h 肌管數(shù)分別為(48.2 ± 7.1)/ 孔和(23.4 ± 4.9)/ 孔,6 d 肌管數(shù)分別為(40.6 ± 10.2)/ 視野和(63.1 ±6.1)/ 視野,兩組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P  lt; 0.01)。 結(jié) 論 Myl 可能通過促使Mb 終末分化,負(fù)性影響Mb 增殖而在肌肉再生中發(fā)揮一定作用。

引用本文: 張素珍,解慧琪,徐永,李秀群,鄧力,陳曉禾,邱琳,楊志明. 肌球蛋白輕鏈在肌肉再生中作用的體外實驗研究. 中國修復(fù)重建外科雜志, 2008, 22(6): 753-758. doi: 復(fù)制