• 中國藥品生物制品檢定所 醫(yī)療器械質量監(jiān)督檢驗中心(北京,100050);

目的 探討采用超濾離心法減少重組人脫細胞真皮基質(recombination human acellular dermal matrix,
rhADM)樣品浸提液對ELISA 方法檢測牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)殘留量的基質效應。 方 法 清
洗rhADM 后,制備rhADM 生理鹽水浸提液。取超濾離心管若干,分別加入1 mg/mL BSA 溶液(預飽和方式1,記作
PR1)、10 μg/mL BSA 溶液(預飽和方式2,記作PR2)和rhADM 浸提液2 mL(記作rhADM1 和rhADM2),1 500 × g 離
心20 min,重復操作3 次后取出離心管內管,放入未使用的15 mL 離心管中,在PR1 和PR2 管中加入10 μg/mL BSA 溶液
4 mL,rhADM 管中加入rhADM 浸提液4 mL,同上法離心后,收集濾液。用ELISA 法測定BSA 含量。計算不同預飽和
方式下10 μg/mL BSA 溶液的BSA 回收率(以未經處理的10 μg/mL BSA 溶液作為基礎樣品,分別記作R10 和R20);計算
濾液稀釋倍數的對數與測定吸光度(A)值的相關系數,并與未經超濾離心處理的浸提液檢測結果進行比較。 結果 采
用預飽和方式1 處理后,PR1 BSA 濃度為(23.80 ± 1.58)μg/mL,R10 為(9.04 ± 0.24)μg/mL,BSA 回收率為263.4% ±16.9%。采用預飽和方式2 處理后,PR2 BSA 濃度為(8.64 ± 0.24)μg/mL,R20 為(8.12 ± 1.01) μg/ mL,BSA 的回收率為106.5% ± 3.0%。預飽和方式2 的回收率符合檢測要求。不同預飽和方式下BSA 回收率差異有統計學意義(P  lt; 0.01)。經超濾離心處理后,濾液稀釋倍數的對數與A 值之間的相關性明顯提高,相關系數由 — 0.727 提高至 — 0.960。超濾處理后的相關系數符合檢測要求。 結論 超濾離心處理可以有效減少rhADM 樣品浸提液的基質效應對BSA 殘留量檢測的
影響;樣品浸提液自身對超濾離心管的預飽和處理,可得到較為理想的BSA 回收率。

引用本文: 方玉,杜曉丹,奚廷斐,馮曉明. 超濾離心法降低重組人脫細胞真皮基質牛血清白蛋白殘留量檢測中基質效應的實驗研究. 中國修復重建外科雜志, 2008, 22(9): 1125-1129. doi: 復制