目的 利用牛膝關(guān)節(jié)透明軟骨進(jìn)行脫細(xì)胞處理，制備新型可塑形生物材料，探討脫細(xì)胞軟骨基質(zhì)作為組織工程載體材料的可行性。 方法 采集新鮮牛膝關(guān)節(jié)，切取關(guān)節(jié)表面透明軟骨，凍干后低溫粉碎為軟骨微粒，胰酶、Triton X-100 及低張Tris-HCl 溶液聯(lián)合作用進(jìn)行脫細(xì)胞處理，冷凍干燥塑形，紫外線(xiàn)交聯(lián)后制備脫細(xì)胞軟骨基質(zhì)材料。采用組織學(xué)、免疫組織化學(xué)、掃描電鏡、孔隙率測(cè)定及生物力學(xué)檢測(cè)等對(duì)材料的理化性狀進(jìn)行觀察分析。取4 只成年新西蘭白兔骨髓制備BMSCs，傳至第3 代進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。觀察濃度分別為100%、10% 及1% 的材料浸提液培養(yǎng)BMSCs 0、24、48 及72 h 后相對(duì)乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase，LDH）釋放率，以含5%FBS 的DMEM 培養(yǎng)基作為陰性對(duì)照，觀察細(xì)胞毒性作用；并將濃度為1 × 107 個(gè)/mL 的BMSCs 單細(xì)胞懸液與材料復(fù)合培養(yǎng)，觀察細(xì)胞黏附情況。 結(jié)果 制備的脫細(xì)胞軟骨基質(zhì)材料呈白色多孔狀結(jié)構(gòu)。HE 染色示材料由纖維狀的軟骨微粒形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，基質(zhì)內(nèi)無(wú)細(xì)胞成分殘留；阿爾新藍(lán)染色示微顆粒呈藍(lán)色。材料Ⅱ型膠原免疫組織化學(xué)染色呈陽(yáng)性。掃描電鏡材料為多孔狀海綿結(jié)構(gòu)，孔徑30 ～ 150 μm。壓汞法測(cè)定材料平均孔隙率為89.37%，平均孔徑為90.8 μm。力學(xué)分析示脫細(xì)胞軟骨基質(zhì)材料的壓縮模量為（17.91 ±0.98） MPa，未經(jīng)脫細(xì)胞處理的軟骨微粒材料壓縮模量為（15.12 ± 0.77）MPa，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）；與正常牛關(guān)節(jié)軟骨的（26.30 ± 1.98）MPa 比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)顯示，培養(yǎng)0、24、48 及72 h，100%、10%、1% 濃度材料浸提液條件培養(yǎng)基和陰性對(duì)照DMEM 培養(yǎng)基相對(duì)LDH 釋放率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。細(xì)胞黏附實(shí)驗(yàn)顯示細(xì)胞可黏附于材料上，生長(zhǎng)狀態(tài)良好。 結(jié)論 牛關(guān)節(jié)軟骨經(jīng)脫細(xì)胞處理后，制成的多孔狀脫細(xì)胞軟骨基質(zhì)材料，既保持了軟骨基質(zhì)中的主要成分，又具有良好的理化性質(zhì)和生物相容性，可作為組織工程研究的一種新型載體材料。
引用本文： 楊自權(quán),何君仁,李剛,楊述華,衛(wèi)小春. 可塑形脫細(xì)胞軟骨基質(zhì)材料的制備及性狀研究. 中國(guó)修復(fù)重建外科雜志, 2008, 22(10): 1232-1237. doi: 復(fù)制