目的 探討兔口腔黏膜細(xì)胞的體外培養(yǎng)方法，并以其為種子細(xì)胞與異體膀胱黏膜下脫細(xì)胞基質(zhì)（bladder acellular matrix graft，BAMG）復(fù)合，構(gòu)建組織工程尿道。 方法 18 只10 周齡雄性新西蘭大耳白兔，體重0.3 ～ 0.5 kg。取其中12 只兔口腔黏膜組織，分離獲得口腔黏膜細(xì)胞。將口腔黏膜細(xì)胞分別接種于有3T3 細(xì)胞及無3T3細(xì)胞的培養(yǎng)皿進(jìn)行培養(yǎng)，接種后第2 天于倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化，繪制細(xì)胞生長曲線，觀察生長增殖情況，并行免疫熒光組織化學(xué)染色鑒定。取余6 只兔膀胱，經(jīng)脫細(xì)胞處理制備BAMG，隨機(jī)取1 cm × 1 cm 組織行HE 染色，觀察脫細(xì)胞效果。將接種于有3T3 細(xì)胞培養(yǎng)皿培養(yǎng)獲得的第2 代口腔黏膜細(xì)胞種植于BAMG 上，培養(yǎng)1 周后，行HE 染色及掃描電鏡觀察口腔黏膜細(xì)胞與BAMG 的復(fù)合狀況。 結(jié)果 倒置相差顯微鏡下觀察，接種于有3T3 細(xì)胞培養(yǎng)皿的口腔黏膜細(xì)胞可傳至7 ～ 8 代，其細(xì)胞形態(tài)均一，功能良好；無3T3 細(xì)胞培養(yǎng)皿的口腔黏膜細(xì)胞形態(tài)多樣，傳至第2 代時，即開始出現(xiàn)老化。細(xì)胞生長曲線顯示，兩種方法培養(yǎng)的口腔黏膜細(xì)胞均于第8 天開始呈對數(shù)增長，第14 天達(dá)峰值。接種于有3T3 細(xì)胞培養(yǎng)皿的口腔黏膜細(xì)胞，培養(yǎng)至融合時所獲得細(xì)胞數(shù)量明顯多于接種于無3T3 細(xì)胞培養(yǎng)皿的口腔黏膜細(xì)胞。兩種方法培養(yǎng)的口腔黏膜細(xì)胞行免疫熒光染色，均呈綠色熒光。HE 染色觀察，BAMG 經(jīng)脫細(xì)胞處理后未見細(xì)胞，脫細(xì)胞效果良好。復(fù)合培養(yǎng)1 周后，HE 染色及掃描電鏡觀察口腔黏膜細(xì)胞與BAMG 復(fù)合良好。 結(jié)論 兔口腔黏膜細(xì)胞可在體外成功培養(yǎng)、擴(kuò)增，與同種異體BAMG 復(fù)合后生長良好，為構(gòu)建組織工程尿道提供了一種新的選擇。
引用本文： 李超,徐月敏,宋魯杰,崔磊,尹爍. 應(yīng)用組織工程口腔黏膜重建尿道的初步實(shí)驗(yàn)研究. 中國修復(fù)重建外科雜志, 2008, 22(10): 1242-1245. doi: 復(fù)制