目的 研究角蛋白17（keratin 17，K-17）對血管內皮細胞遷移、增殖和管樣結構形成的影響，了解K-17 在血管生成過程中的作用。 方法 將人臍靜脈內皮細胞（human umbilical vein endothelial cell，HUVEC）于含10%FBS 的DMEM 培養(yǎng)液培養(yǎng)過夜，采用脂質體轉染法向HUVEC 中分別加入K-17- 小分子干擾RNA（small interferingRNA，siRNA）- 轉染試劑（Lipofectamine 2000）混合液（實驗組）、siRNA- 轉染試劑混合液（陰性對照組），使siRNA 終濃度為50 nmol/L；對照組加相同體積僅含載體（脂質體Lipofectamine 2000）的培養(yǎng)基，采用RT-PCR 和Western blot 法檢測K-17-siRNA 沉默效果。于培養(yǎng)后36 h 采用細胞計數(shù)法檢測細胞增殖能力；培養(yǎng)后30 h，分別采用24 孔板Millicell小室檢測細胞遷移能力以及膠原纖維凝膠實驗法檢測細胞分化成管能力。另取未經(jīng)siRNA 處理的HUVEC 分別在含10%FBS 的培養(yǎng)基（A 組）、含2%FBS 的培養(yǎng)基（B 組）和含2%FBS 及10 ng/mL bFGF 的培養(yǎng)基（C 組）中培養(yǎng)24 h，檢測HUVEC K-17 的表達。 結果 實驗組K-17-siRNA 作用于HUVEC 30 h 后，RT-PCR 檢測示細胞內K-17 mRNA 的表達為0.09 ± 0.01，較陰性對照組0.35 ± 0.07 和對照組0.34 ± 0.06 均降低了約74%（P lt; 0.01）；Western blot 檢測示實驗組K-17-siRNA 作用于HUVEC 30 h 后，細胞內K-17 蛋白表達為0.19 ± 0.01，較陰性對照組0.52 ± 0.01 和對照組0.55 ± 0.02分別降低了63% 和65%（P lt; 0.01）；陰性對照組和對照組間比較差異均無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。K-17-siRNA 作用HUVEC 36 h 后，實驗組細胞增殖能力與陰性對照組和對照組比較差異均無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。HUVEC 轉染K-17-siRNA 30 h 后，實驗組HUVEC 24 h 穿過Millicell 小室上室膜進入下室的細胞數(shù)為（3 719.0 ± 319.0）個，明顯低于陰性對照組（7 356.3 ± 795.7）個和對照組（7 437.5 ± 212.0）個，差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.01），陰性對照組和對照組間差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。實驗組、陰性對照組和對照組HUVEC 24 h 分化形成的管數(shù)分別為（1.1 ± 0.5）、（3.6 ± 0.5）和（3.2 ±0.6）管/ 視野，實驗組與陰性對照組、對照組間比較差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.01），陰性對照組和對照組間比較差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。A、B、C 組HUVEC K-17 的表達分別為0.25 ± 0.02、0.08 ± 0.01 和0.72 ± 0.03，3 組間比較差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.01）。 結論 K-17 對HUVEC 增殖無影響，但增強其遷移能力，有利于血管生成。
引用本文： 徐永,張素珍,鐘振華,解慧琪,蘇自奮,魏于全. 角蛋白在血管生成中的作用實驗研究. 中國修復重建外科雜志, 2008, 22(10): 1246-1250. doi: 復制