目的 通過體外培養(yǎng)不同代次的犬膀胱平滑肌細(xì)胞，比較其生物學(xué)特征，探討多次傳代后的平滑肌細(xì)胞作為種子細(xì)胞的可行性，為構(gòu)建組織工程膀胱和尿道篩選種子細(xì)胞提供方法和依據(jù)。 方法 取體重10 ～ 12 kg 的12 月齡雄性犬膀胱肌層，混合酶消化法獲取平滑肌細(xì)胞，并于含10% 小牛血清的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，觀察比較不同代次細(xì)胞的形態(tài)變化及生長、增殖過程，電鏡下觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)，并通過免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)特征性蛋白的表達(dá)。 結(jié)果 體外培養(yǎng)的平滑肌細(xì)胞單層生長至亞融合狀態(tài)后，倒置相差顯微鏡下細(xì)胞呈長梭形，并呈峰- 谷樣結(jié)構(gòu)，可連續(xù)傳至12 代。生長曲線顯示第7 代以前的細(xì)胞具有相似的增殖特點(diǎn)，約每40 小時(shí)為1 次生長周期，透射電鏡下可見平滑肌細(xì)胞特有的密體結(jié)構(gòu)，平滑肌肌動(dòng)蛋白免疫組織化學(xué)染色為陽性；第7 代后細(xì)胞增殖逐漸遲滯，至第10 代細(xì)胞內(nèi)肌絲及密體結(jié)構(gòu)消失。 結(jié)論 犬膀胱平滑肌細(xì)胞可在體外連續(xù)培養(yǎng)，通過適當(dāng)?shù)募兓椒色@得大量高純度的平滑肌細(xì)胞。第7 代以前的平滑肌細(xì)胞均可作為種子細(xì)胞，用于構(gòu)建組織工程膀胱和尿道。
引用本文： 智偉,楊志明,陳曉禾,李秀群,韓平,譚美云,唐耘熳,鄧力. 犬膀胱平滑肌細(xì)胞的體外連續(xù)培養(yǎng). 中國修復(fù)重建外科雜志, 2008, 22(12): 1476-1480. doi: 復(fù)制