目的 對體外培養(yǎng)大鼠軟骨細(xì)胞復(fù)制性老化行為進行觀察，為進一步研究組織工程軟骨退變機制，以及用藥物干預(yù)并逆轉(zhuǎn)其退變提供實驗參考。方法 4周齡SD大鼠，體重185～200 g，斷頸處死，分離培養(yǎng)軟骨細(xì)胞，采用組織化學(xué)法檢測傳代培養(yǎng)的P1、P2、P3及P4代軟骨細(xì)胞老化相關(guān)β-半乳糖苷酶，透射電鏡觀察細(xì)胞結(jié)構(gòu)，免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測增殖細(xì)胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)表達，阿力新藍染色檢測胞外基質(zhì)硫酸糖胺多糖 (sulfat-glycosaminoglycan，GAG)含量和分子結(jié)構(gòu)，RT-PCR方法檢測軟骨細(xì)胞Ⅱ型膠原表達，流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期及增殖指數(shù)（proliferative index，PI）。結(jié)果 β-半乳糖苷酶檢測：P1、P2代軟骨細(xì)胞偶見陽性染色；P3代可見少數(shù)細(xì)胞陽性染色，與P1、P2代比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)；P4代與P1～P3代比較，陽性染色顯著增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01) 。透射電靜鏡觀察：P1、P2代細(xì)胞胞漿內(nèi)細(xì)胞器較多，胞核及核仁清晰，無凋亡軟骨細(xì)胞；P3代細(xì)胞核漿比較大，胞漿內(nèi)細(xì)胞器減少，膠原網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)模糊不清；P4代細(xì)胞核漿比例增大，核固縮。P4代細(xì)胞G0/G1期含量增加（83.8％），而P1、P2及P3代分別為79.1%，79.2%，80.8%。P4代細(xì)胞PI為16．2％，P1、P2、P3代PI分別為20.9%、20.8%、19.2%。PCNA表達、GAG含量、長鏈分子百分比、Ⅱ型膠原表達減少等指標(biāo)P4代與前代比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt;0．01）。結(jié)論 體外培養(yǎng)的大鼠軟骨細(xì)胞P4代出現(xiàn)老化。
引用本文： 林建華,陳曉東,鄧凌霄,吳朝陽. 大鼠軟骨細(xì)胞復(fù)制性老化的體外觀察. 中國修復(fù)重建外科雜志, 2007, 21(11): 1228-1232. doi: 復(fù)制
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