目的 探討體外快速培養(yǎng)犬膀胱平滑肌細(xì)胞的方法及觀察膀胱 平滑肌細(xì)胞在脫細(xì)胞小腸黏膜下層（small intestinal submucosa, SIS）上的生長(zhǎng)狀況， 為構(gòu)建組織工程膀胱平滑肌組織提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法 分別采用酶消化 法和組織塊培養(yǎng)法分離、獲取和原代培養(yǎng)犬膀胱平滑肌細(xì)胞，倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞的 生長(zhǎng)情況，透射電鏡觀察細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)，免疫組織化學(xué)染色進(jìn)行細(xì)胞鑒定。將犬膀胱平滑 肌細(xì)胞接種到SIS支架材料上，于復(fù)合培養(yǎng)5、7及9d 取材，行蘇木素染色、石蠟切片HE 染色和掃描電鏡觀察膀胱平滑肌細(xì)胞在SIS上的生長(zhǎng)狀況。以細(xì)胞SIS復(fù)合培養(yǎng)組為實(shí)驗(yàn)組 ，以膀胱平滑肌細(xì)胞為對(duì)照組，每組各設(shè)9孔，分別于接種后3、5及7d取材，酶消化后收集 細(xì)胞并計(jì)數(shù)。結(jié)果酶消化法原代培養(yǎng)獲取犬膀胱平滑肌細(xì)胞數(shù)量 多， 細(xì)胞生長(zhǎng)速度快，形態(tài)良好，培養(yǎng)5d細(xì)胞在培養(yǎng)瓶底生長(zhǎng)匯合。組織塊培養(yǎng)法接種3d見長(zhǎng) 梭形的膀胱平滑肌細(xì)胞從植塊邊緣萌出，獲取的細(xì)胞數(shù)量較少。透射電鏡下見膀胱平滑肌細(xì) 胞胞質(zhì)中有特征性細(xì)肌絲和細(xì)胞膜的密斑?？功?肌動(dòng)蛋白免疫組織化學(xué)染色胞漿呈棕黃色 陽(yáng)性反應(yīng)。膀胱平滑肌細(xì)胞在SIS表面能黏附、生長(zhǎng)和增殖。體外復(fù)合培養(yǎng)5d后，膀胱平滑 肌細(xì)胞鋪滿SIS表面，呈單層細(xì)胞結(jié)構(gòu)。7、9d細(xì)胞形態(tài)與5d相似。實(shí)驗(yàn)組3、5及7d的細(xì) 胞計(jì)數(shù)分別為（16.85±0.79）×105、（39.74±2.16）×105及（37.15±2.02）×10 5個(gè)，對(duì)照組分別為（19.43±0.54）×105、（34.50±1.85）×105及（33.07±1.31 ）×105個(gè)。兩組5d細(xì)胞計(jì)數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論 酶消化法原代培養(yǎng)膀胱平滑肌細(xì)胞可提供大量活性良好的種子細(xì)胞。SIS支持膀胱平滑 肌細(xì)胞黏附和生長(zhǎng)，可為構(gòu)建組織工程膀胱平滑肌組織提供良好支架。

引用本文： 韓平,楊志明,智偉,李秀群,羅靜聰,解慧琪. 膀胱平滑肌細(xì)胞與小腸黏膜下層體外復(fù)合培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)研究. 中國(guó)修復(fù)重建外科雜志, 2007, 21(12): 1366-1370. doi: 復(fù)制