目的 在體外運(yùn)用人骨形成蛋白7(human bone morphogeneticprotein 7,hBMP7)基因重組35 型腺病毒(recombinant adenovirus’s containing fibers derived from Bgroup serotype 35，rAd5/F35) 誘導(dǎo)大鼠脂肪源性干細(xì)胞（adiposederived adult stem cell, ADASC）向成骨細(xì)胞定向分化，為骨組織工程探索新的細(xì)胞來源。 方法 以pcDNA1.1/氨芐青霉素-hBMP-7質(zhì)粒為模板擴(kuò)增hBMP-7基因，將回收的PCR產(chǎn)物片段克隆入pDC316載體，獲得重組質(zhì)粒pDC316-hBMP-7。骨架質(zhì)粒pBHG-fiber5/35和穿梭質(zhì)粒pDC316-hBMP-7共轉(zhuǎn)染293細(xì)胞，同源重組產(chǎn)生rAd5/F35-hBMP-7。同樣的方法構(gòu)建rAd5/F35增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(enhanced green fluorescent protein, EGFP)。在體外分別轉(zhuǎn)染大鼠ADASC并留置空白對(duì)照。觀察細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)情況，ELISA檢測(cè)轉(zhuǎn)染基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，檢測(cè)鈣結(jié)節(jié)和骨鈣素等成骨細(xì)胞表型。 結(jié)果　PCR、酶切鑒定表明rAd5/F35－h(huán)BMP-7質(zhì)粒構(gòu)建正確。rAd5/F35-EGFP對(duì)大鼠ADASC中轉(zhuǎn)染效率可達(dá)90%以上，hBMP-7基因存在于轉(zhuǎn)染后的ADASC中并表達(dá)相應(yīng)的蛋白，誘導(dǎo)組鈣結(jié)節(jié)形成，電鏡見胞質(zhì)中有鈣質(zhì)成分，堿性磷酸酶陽(yáng)性，骨鈣素表達(dá)增強(qiáng)。 結(jié)論 rAd5/F35介導(dǎo)hBMP-7基因可促進(jìn)ADASC向成骨細(xì)胞定向分化。

引用本文： 康焱,廖威明,袁振華,張瓏涓,原向偉,雷磊,黃保丁. 重組35 型腺病毒介導(dǎo)人骨形成蛋白基因?qū)χ驹葱愿杉?xì)胞的誘導(dǎo)分化. 中國(guó)修復(fù)重建外科雜志, 2007, 21(2): 125-129. doi: 復(fù)制