目的 構(gòu)建含有人骨形成蛋白4(human bone morphogenetic protein 4，hBMP-4)的非復(fù)制型腺病毒表達(dá)載體pAdE/hBMP-4并檢測其表達(dá)。 方法 酶切質(zhì)粒pCS2(+)/hBMP-4獲得目的基因片段，克隆至真核表達(dá)載體pcDNA3.1(+)，再亞克隆至pShuttle-CMV，電轉(zhuǎn)化至含有pAdEasy-1骨架質(zhì)粒的E.coli BJ5183/p中進(jìn)行同源重組，重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞包裝成含有hBMP-4基因的非復(fù)制型腺病毒。病毒顆粒感染HEK293和HeLa細(xì)胞，提取總RNA和總蛋白，進(jìn)行RT-PCR和Western- blot檢測。結(jié)果 獲得了含有目的基因hBMP-4的非復(fù)制型腺病毒表達(dá)載體pAdE/hBMP-4，酶切鑒定提示構(gòu)建正確，RT-PCR檢測到hBMP-4基因的轉(zhuǎn)錄，Western- blot檢測到hBMP-4蛋白表達(dá)。 結(jié)論 將目的基因hBMP-4克隆至非復(fù)制型腺病毒表達(dá)載體中，為進(jìn)一步研究其在基因治療骨缺損中的應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

引用本文： 王興宇,汪春蘭,趙宇,王幫河,姚遠(yuǎn),朱華鋒,何金生. 表達(dá)人骨形成蛋白4的非復(fù)制型腺病毒的構(gòu)建與鑒定. 中國修復(fù)重建外科雜志, 2007, 21(4): 396-400. doi: 復(fù)制