目的 探索人膠質(zhì)源性神經(jīng)生長因子（human glial derived neurotrophic factor，hGDNF）真核表達載體，體內(nèi)直接轉(zhuǎn)染SD大鼠脊髓組織治療急性脊髓損傷(spinal cord injury, SCI)的可能性。 方法 基因重組和限制性內(nèi)切酶酶切構(gòu)建真核表達載體pcDNA3-hGDNF，經(jīng)脂質(zhì)體DOTAP介導(dǎo)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染SD大鼠脊髓組織，作為實驗組；對照組大鼠直接注射空載體脂質(zhì)體混合物。14 d后取材，RT-PCR及Western blot檢測hGDNF mRNA及蛋白表達。 結(jié)果 重組真核表達載體pcDNA3-hGDNF經(jīng)限制性內(nèi)切酶Hind III和XbaⅠ酶切后，電泳顯示400 bp hGDNF目的片段和5 400 bp pcDNA3載體片段。轉(zhuǎn)染大鼠脊髓組織后14 d，RTPCR檢測出目的基因mRNA，Western blot檢測出hGDNF的蛋白表達。 結(jié)論 構(gòu)建的真核表達載體pcDNA3-hGDNF能在轉(zhuǎn)染的大鼠脊髓組織中表達，可為基因治療修復(fù)急性SCI奠定基礎(chǔ)。
引用本文： 李琦,曾炳芳,徐建廣,孔維清. 人膠質(zhì)源性神經(jīng)生長因子真核表達載體構(gòu)建及在大鼠脊髓組織中的表達. 中國修復(fù)重建外科雜志, 2007, 21(5): 482-486. doi: 復(fù)制