目的 確定SP1誘騙性寡核苷酸(Decoy Oligodeoxynucleotides，ODNs）在Oligofectamine介導(dǎo)下轉(zhuǎn)染豬血管內(nèi)皮細(xì)胞系SV-40-PED的最佳轉(zhuǎn)染條件和效果。方法 以SV-40-PED為轉(zhuǎn)染對(duì)象，在6孔培養(yǎng)板中,接種SV-40-PED細(xì)胞2×105/孔，將4 μl Oligofectamine和不同濃度的SP1 ODNs(2.5、5.0、7.5、10.0和12.5 μl)分別溶于100 μl無(wú)血清、無(wú)抗生素的DMEM培養(yǎng)基，室溫放置20min后轉(zhuǎn)染細(xì)胞，SP1 ODNs最終濃度分別為50、100、150、200和250 nmol/L、轉(zhuǎn)染26 h檢測(cè)不同濃度轉(zhuǎn)染情況，確定最佳SP1 ODNs與Oligofectamine的比率、轉(zhuǎn)染時(shí)間；流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的相對(duì)熒光強(qiáng)度及攝取率評(píng)價(jià)轉(zhuǎn)染效率；熒光顯微鏡觀察細(xì)胞內(nèi)熒光分布；測(cè)定細(xì)胞上清乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase, LDH)含量，觀察細(xì)胞損傷情況。結(jié)果〓SV-40-PED在Oligofectamine的介導(dǎo)下可以攝取SP1 ODNs。SP1 ODNs終濃度為50、100、150 nmol/L 組細(xì)胞形態(tài)無(wú)明顯變化，終濃度為200、250 nmol/L組細(xì)胞收縮、變圓后逐漸恢復(fù)；SP1 ODNs終濃度為250 nmol/L時(shí), 轉(zhuǎn)染26 h時(shí)細(xì)胞形態(tài)也無(wú)明顯變化,48、72 h時(shí)有細(xì)胞漂浮現(xiàn)象。熒光下觀察,轉(zhuǎn)染成功各組熒光物質(zhì)分布于細(xì)胞核內(nèi),其中SP1 ODNs終濃度為200、250nmol/L組可見清晰核仁，濃度越高，熒光強(qiáng)度越強(qiáng)，細(xì)胞內(nèi)熒光物質(zhì)主要聚集于細(xì)胞核。SP1 ODNs終濃度為250 nmol/L時(shí)，轉(zhuǎn)染72 h組LDH濃度為137.12±3.92 U/L，顯著高于26 h的49.61±17.13 U/L和48 h的120.26±8.42 U/L，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P lt;0.01)；當(dāng)轉(zhuǎn)染時(shí)間為26 h時(shí)，各濃度組上清液LDH值差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt;0.05）。結(jié)論SP1 ODNs終濃度為250 nmol/L、轉(zhuǎn)染26h時(shí)可以為SV-40-PED轉(zhuǎn)染提供良好效果。

引用本文： 黃亞冰,徐婧,陳松,謝林,王璐,尹注增,左利群,陳實(shí). Oligofectamine介導(dǎo)轉(zhuǎn)錄因子SP1誘騙性寡核苷酸轉(zhuǎn)染豬內(nèi)皮細(xì)胞系條件的優(yōu)化研究. 中國(guó)修復(fù)重建外科雜志, 2007, 21(8): 877-881. doi: 復(fù)制