目的 探討將編碼細(xì)胞轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1（transfor ming gr owth factor β1，TGF-β1）的重組PGL3-TGF-β1質(zhì)粒轉(zhuǎn)染兔骨髓基
質(zhì)干細(xì)胞（marrow stromal stem cells，MSCs ），體外通過(guò)自分泌、誘導(dǎo)作用向軟骨細(xì)胞方向分化的可行性，為基因加強(qiáng)組織工程學(xué)修復(fù) 軟骨損傷提供體外實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法 兔MSCs體外密度梯度離心及貼壁篩選法分離培養(yǎng)，脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染重組PGL3-TGF-β1，轉(zhuǎn)染后繪制不同時(shí)期細(xì)胞生長(zhǎng)曲線，MTT法分析轉(zhuǎn)染后細(xì)胞(實(shí)驗(yàn)組)生長(zhǎng)活性，以未轉(zhuǎn)染空載體細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)對(duì)照組，未轉(zhuǎn)染細(xì)胞為空白對(duì)照組；轉(zhuǎn)染后第2、7天，分別進(jìn)行抗TGF-β1和抗Ⅱ型膠原蛋白的免疫組織化學(xué)染色（SABC法），以未轉(zhuǎn)染細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)對(duì)照組，PBS作為一抗為空白對(duì)照組，進(jìn)行圖像定量分析。 結(jié)果 MSCs體外分離培養(yǎng)，脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染后，生長(zhǎng)曲線顯示轉(zhuǎn)染后細(xì)胞生長(zhǎng)活性較對(duì)照組降低，MTT法顯示實(shí)驗(yàn)組及實(shí)驗(yàn)對(duì)照組吸光度（A）值較空白對(duì)照組低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；實(shí)驗(yàn)組轉(zhuǎn)染細(xì)胞第2天，抗TGF-β1免疫組織化學(xué)染色可見細(xì)胞內(nèi)陽(yáng)性顆粒，實(shí)驗(yàn)對(duì)照組及空
白對(duì)照組均為陰性；轉(zhuǎn)染細(xì)胞第7天，抗Ⅱ型膠原免疫組織化學(xué)染色實(shí)驗(yàn)組可見細(xì)胞內(nèi)陽(yáng)性顆粒，實(shí)驗(yàn)對(duì)照組及空白對(duì)照組均為陰性。圖像分析示，實(shí)驗(yàn)組抗TGF-β1及抗Ⅱ型膠原免疫組織化學(xué)染色陽(yáng)性值與實(shí)驗(yàn)對(duì)照組及空白對(duì)照組相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。 結(jié)論 脂質(zhì)體法重組PGL3-TGF-β1基因可成功轉(zhuǎn)染兔MSCs，但對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)有一定影響，轉(zhuǎn)染細(xì)胞表達(dá)TGF-β1，通過(guò)其自分泌、誘導(dǎo)作用，細(xì)胞分泌Ⅱ型膠原蛋白，表現(xiàn)出軟骨細(xì)胞樣生理特征，并向軟骨細(xì)胞方向分化。

引用本文： 雷磊,廖威明,盛璞義,黃綱,江麗. 重組PGL3-轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1基因轉(zhuǎn)染兔骨髓基質(zhì)干細(xì)胞體外誘導(dǎo)向軟骨細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究. 中國(guó)修復(fù)重建外科雜志, 2006, 20(2): 134-138. doi: 復(fù)制