目的 研究快速培養(yǎng)和純化豬角朊細(xì)胞的方法及觀察角朊細(xì)胞在脫細(xì)胞羊膜上的生長狀況,為組織工程皮膚研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法 采用加10％胎牛血清的人無血清角朊細(xì)胞培養(yǎng)基(defined keratinocyteSFM，DKSFM)培養(yǎng)原代豬角朊細(xì)胞，分別用DKSFM(A組)、加5％胎牛血清的DKSFM(B組)、加10％胎牛血清的DKSFM(C組)培養(yǎng)傳代豬角朊細(xì)胞，于接種后1、3、5和7 d觀察豬角朊細(xì)胞的形態(tài)及生長曲線。利用豬角朊細(xì)胞與培養(yǎng)瓶黏附牢固的特點(diǎn)，用0.02%乙二胺四乙酸(ethylene diamine tetraacetic acid,EDTA)和0.05％胰蛋白酶分步消化，純化細(xì)胞。 將第2代豬角朊細(xì)胞接種在凍干脫細(xì)胞羊膜上，直接蘇木素染色、石蠟切片、免疫組織化學(xué)染色等方法觀察豬角朊細(xì)胞在脫細(xì)胞羊膜上的生長狀況。 結(jié)果 采用加10％胎牛血清的DKSFM培養(yǎng)原代豬角朊細(xì)胞，細(xì)胞生長速度快，形態(tài)好，培養(yǎng)5 d鋪滿培養(yǎng)瓶底60％~70％。B組培養(yǎng)的傳代豬角朊細(xì)胞生長速度較C組培養(yǎng)豬角朊細(xì)胞生長速度快。A組培養(yǎng)傳代的角朊細(xì)胞，細(xì)胞生長緩慢。用0.02%EDTA和0.05％胰蛋白酶分步消化的方法純化豬角朊細(xì)胞，可獲得純度為95％以上的豬角朊細(xì)胞。將第2代豬角朊細(xì)胞接種在脫細(xì)胞羊膜后12 d，可形成單層細(xì)胞，呈多角形、鋪路石樣排列；14 d和16 d細(xì)胞進(jìn)一步密集，16 d細(xì)胞出現(xiàn)老化。 結(jié)論 10％胎牛血清的DKSFM培養(yǎng)原代豬角朊細(xì)胞，5％胎牛血清的DKSFM培養(yǎng)傳代豬角朊細(xì)胞，細(xì)胞生長速度快。用0.02%EDTA和0.05％胰蛋白酶分步消化的方法純化豬角朊細(xì)胞，可以獲得高純度豬角朊細(xì)胞。脫細(xì)胞羊膜為豬角朊細(xì)胞提供良好的支架，接種培養(yǎng)后12 d，細(xì)胞形態(tài)最好。

引用本文： 范偉杰,楊志明,李秀群,王珍,智偉,邱琳. 快速培養(yǎng)純化豬角朊細(xì)胞及復(fù)合羊膜體外培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)研究. 中國修復(fù)重建外科雜志, 2006, 20(3): 282-286. doi: 復(fù)制