目的 通過(guò)觀察鹿茸多肽對(duì)白細(xì)胞介素 1β（interleukin 1β，IL-1β）誘導(dǎo)軟骨表型化骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（marrow mesenchymal stem cells，MSCs）凋亡的影響，以優(yōu)化軟骨組織工程的種子細(xì)胞。方法 新西蘭大白兔2只，抽取其骨髓；經(jīng)密度梯度離心得到單核細(xì)胞，經(jīng)體外分離、培養(yǎng)獲得兔MSCs。用轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1（transforming growth factor β1，TGF-β1）和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）將其誘導(dǎo)分化軟骨表型。將軟骨表型化MSCs隨機(jī)分成A組（空白對(duì)照組）：5%胎牛血清的αMEM培養(yǎng)液；B組（IL-1β組）：5%胎牛血清的αMEM培養(yǎng)液加入100 ng IL-1β；C組（鹿茸多肽組）：5%胎牛血清的αMEM培養(yǎng)液加入10 μg/ml鹿茸多肽作用3d后再加入100 ng IL-1β；D組（TGF-β1組）：5%胎牛血清的α-MEM培養(yǎng)液加10 ng/ml TGF-β1作用3 d后再加入100 ng IL-1β。分別于培養(yǎng)24、48和72 h后取樣，采用透射電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)，Annexin V法檢測(cè)細(xì)胞凋亡率，RT-PCR技術(shù)分析Caspase-3 mRNA表達(dá)水平，ELISA法檢測(cè)Caspase-3蛋白酶活性。結(jié)果 透射電鏡觀察：B組24 h后細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)開(kāi)始呈塊狀凝集，分布于核膜下，核膜不規(guī)則；48 h后細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)凝集加?。?2 h后部分細(xì)胞內(nèi)的核碎片凝集成凋亡小體。各時(shí)間點(diǎn)C、D組細(xì)胞結(jié)構(gòu)改變相對(duì)滯后，且數(shù)量較少；A組細(xì)胞結(jié)構(gòu)幾乎無(wú)明顯改變。各時(shí)間點(diǎn)B組MSCs凋亡率、Caspase-3 mRNA表達(dá)及蛋白酶活性逐漸增高，與A組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt;0.01）；C、D組與B組比較則逐漸下降，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt;0.05）。結(jié)論 Caspase3參與MSCs凋亡，鹿茸多肽通過(guò)減少Caspase-3 mRNA表達(dá)，并抑制其蛋白酶活性，阻止或逆轉(zhuǎn)軟骨表型化MSCs凋亡。
引用本文： 林建華,修忠標(biāo),吳朝陽(yáng),王日雄. 鹿茸多肽對(duì)軟骨表型化骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞凋亡的影響. 中國(guó)修復(fù)重建外科雜志, 2006, 20(4): 427-430. doi: 復(fù)制