目的 探討兩步冷凍法不同冷凍溫度對(duì)周圍神經(jīng)雪旺細(xì)胞（Schwann cell， SC）生物活性的影響。方法 雌性SD大鼠80只，切取雙側(cè)坐骨神經(jīng)2 cm，隨機(jī)分為8組，每組10只20條坐骨神經(jīng)。1組為新鮮對(duì)照組，不作任何處理；另7組為實(shí)驗(yàn)組，采用兩步冷凍法分別降溫至-20、-30、-40、-50、-60、-70和-80 ℃，保存2 h后轉(zhuǎn)入液氮中(-196℃)保存48 h，取出后在37℃水浴箱中快速?gòu)?fù)溫1 min，消化收集各組SC，經(jīng)CalceimAM熒光染色，作流式細(xì)胞儀分析，求出各組細(xì)胞平均熒光強(qiáng)度，再經(jīng)共聚焦顯微鏡直接觀察SC熒光強(qiáng)度，進(jìn)一步判斷SC的生物活性。結(jié)果 經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組SC熒光強(qiáng)度為新鮮對(duì)照組242.522 0±9.568 4，-20 ℃組168.677 0±10.207 0，-30 ℃組214.992 0±8.329 1，-40 ℃組235.526 0±9.280 5，-50 ℃組222.434 0±8.515 5，-60 ℃組217.409 0±9.515 7，-70 ℃組132.376 0±13.459 7，-80 ℃組108.1320±16.033 1；-40℃組熒光強(qiáng)度較其它實(shí)驗(yàn)組強(qiáng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。共聚焦顯微鏡觀察各組SC生物活性，并作熒光強(qiáng)度分析：新鮮對(duì)照組143.700 0±5.567 8，-20 ℃組119.700 0±5.165 1，-30 ℃組121.300 0±4.347 4，-40 ℃組139.700 0±5.012 2，-50 ℃組121.000 0±4.546 1，-60 ℃組118.400 0±4.926 1，-70 ℃組81.200 0±5.116 4，-80 ℃組79.000 0±5.716 4；新鮮對(duì)照組SC生物活性較各實(shí)驗(yàn)組強(qiáng)，-40℃組SC生物活性較其它實(shí)驗(yàn)組強(qiáng)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。結(jié)論 兩步冷凍法均能較好保存SC生物活性，以-40 ℃組SC生物活性最好。

引用本文： 肖玉周,姚運(yùn)峰,潘功平,周建生,胡汝麒. 兩步冷凍法對(duì)周圍神經(jīng)雪旺細(xì)胞生物活性的影響. 中國(guó)修復(fù)重建外科雜志, 2006, 20(8): 801-804. doi: 復(fù)制