目的 研究人骨形成蛋白2腺病毒表達載體(adenovirusmediated human bone morphogenetic protein 2 gene,Ad-hBMP-2)轉染體外培養(yǎng)兔腰椎間盤細胞,分析其對腰椎間盤細胞的影響。方法 成年健康新西蘭大白兔4只,體重4~5 kg,取L 2、L3到L6、L7節(jié)段椎盤細胞體外培養(yǎng)。利用免疫熒光和蛋白印跡法(Western blot)檢測空白對照組(未轉染)、Ad-LacZ組[感染復數(shù)(multiplicity of infection, MOI)150MOI]和不同劑量Ad-hBMP-2(50、100、150 MOI)組轉染后細胞hBMP-2的表達水平。采用RT-PCR檢測轉染后細胞Ⅱ型膠原和aggrecan mRNA表達水平。結果 轉染Ad-hBMP-2后通過免疫熒光和蛋白印跡法可見隨轉染劑量增加hBMP-2表達量逐漸增加,與50 MOI組比較100 MOI組升高102%,150 MOI組升高183%。在轉染后第6天RT-PCR結果顯示轉染組aggrecan和Ⅱ型膠原mRNA的表達高于對照組,并且隨轉染劑量增高mRNA的表達量均逐漸增加。aggrecan mRNA從50 MOI組的61.7%增加到150 MOI組的167.3%。Ⅱ型膠原mRNA從50 MOI組的77.3%增加到150 MOI組的169.0%。結論Ad-hBMP-2可高效轉染體外培養(yǎng)兔腰椎間盤細胞,隨轉染劑量增加hBMP-2表達量逐漸增加,同時上調aggrecan和Ⅱ型膠原mRNA的表達,并存在劑量依賴關系。
引用本文: 顧海倫,呂剛,劉莉,李建軍,黃濤,王佳. 人骨形成蛋白2腺病毒表達載體轉染體外培養(yǎng)兔腰椎間盤細胞的研究. 中國修復重建外科雜志, 2006, 20(8): 820-824. doi: 復制
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